[发明专利]一种用于电化学检测PDGF-BB的生物传感器及其构建方法

说明书

本发明公开了一种用于电化学检测PDGF‑BB的生物传感器及其构建方法，该生物传感器是在电极表面构建PDGF‑BB抗体—PDGF‑BB—适配体三层夹心式结构，再基于连接在适配体上引物链触发链式杂交反应，通过将杂交序列之一固定在纳米金上，形成网状的DNA结构，能较大的增大电极表面DNA数量；利用DNA上的磷酸根能和钼酸钠反应产生氧化还原电流的原理，实现PDGF‑BB浓度的电化学方法检测，构建的生物传感器用于检测PDGF‑BB具有选择性好、灵敏度高、检测限低，且检测范围宽等优点。

技术领域

本发明涉及一种生物传感器，具体涉及一种用于血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)浓度检测的生物传感器，特别涉及一种适用于电化学检测PDGF-BB浓度的PDGF-BB抗体—PDGF-BB—PDGF-BB适配体-引物三层夹心式结构的生物传感器的构建方法；属于生物传感技术领域。

背景技术

血小板衍生生长因子(PDGF)是贮存于血小板α颗粒中的一种碱性蛋白质，由两条高度同源的A链及B链组成，这使PDGF具有三种形式的二聚体结构，即PDGF-AA，PDGF-BB及PDGF-AB。PDGF是一种重要的促有丝分裂因子,与多种疾病的发生有关。

传统的测定PDGF-BB的方法有荧光免疫分析、放射免疫法，酶联免疫检测法等。这些检测方法虽然在一定程度上灵敏有效，但对技术要求高，耗时耗力，且对仪器有一定的要求，各自具有一定的局限性。相比以上方法，电化学检测法具有仪器简单、操作方便以及灵敏度高等优点。

发明内容

针对现有的检测PDGF-BB方法存在的不足，本发明的目的是在于提供一种选择性好、灵敏度高、检测限低、检测范围宽的用于电化学检测PDGF-BB浓度的PDGF-BB的生物传感器。

本发明的另一个目的是在于提供一种简单、低成本的构建用于电化学检测PDGF-BB浓度的PDGF-BB的生物传感器的方法。

为了实现上述技术目的，本发明提供了一种用于电化学检测PDGF-BB的生物传感器的构建方法，其包括以下步骤：

1)将PDGF-BB抗体修饰到氧化石墨烯表面后，将所述氧化石墨烯固定到电极表面，再采用牛血清白蛋白对所述电极表面进行封闭，得到PDGF-BB抗体修饰电极；

2)取PDGF-BB溶液滴加至所述PDGF-BB抗体修饰电极的表面进行PDGF-BB与PDGF-BB抗体之间的特异性结合反应，得到PDGF-BB抗体—PDGF-BB修饰电极；

3)将PDGF-BB适配体-引物滴加至PDGF-BB抗体—PDGF-BB修饰电极表面进行PDGF-BB与PDGF-BB适配体之间的特异性结合反应，得到具有PDGF-BB抗体—PDGF-BB—PDGF-BB适配体-引物三层夹心式结构的电极；

4)将H1修饰纳米金复合物和H2滴加至具有PDGF-BB抗体—PDGF-BB—PDGF-BB适配体-引物三层夹心式结构的电极表面，进行纳米金增强链式杂交反应，即得；

其中，

H1序列为：5’-TACGTGGCTTGGACCGACCGAATTAACGATA-3’；

H2序列为：5’-GTCCAAGCCACGTATATCGTTAATTCGGTCG-3’；

引物序列为：TATCGTTAATTCGGTCG。

优选的方案，将氧化石墨烯分散液采用含1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-N-羟基琥珀酰亚胺的混合溶液活化后，再与PDGF-BB抗体进行反应，得到PDGF-BB抗体修饰氧化石墨烯，所述PDGF-BB抗体修饰氧化石墨烯滴加到电极表面后，采用牛血清白蛋白对所述电极表面进行封闭，得到PDGF-BB抗体修饰电极。