[发明专利]磁微粒化学发光法测定地高辛含量的试剂盒及其检测方法

说明书

本发明为磁微粒化学发光法测定地高辛含量的试剂盒及其检测方法，提供了一种地高辛抗原衍生物的制备方法，可以实现地高辛抗原与生物素或者酶间接地连接，在试剂盒中构建了生物素化地高辛抗原衍生物+抗体酶标试剂+校准品与酶标地高辛抗原衍生物+生物素化地高辛鼠单抗+校准品两个检测体系，可用于固相偶联，又能用于发光标记的地高辛衍生物，适用于对地高辛抗原进行生物素、酶标甚至蛋白等不同情况的偶联，这样不同企业在测试时可以更灵活的选取，并且只需要通过制备地高辛抗原衍生物这个中间体就能实现。应用该衍生物建立的不同检测体系测值与给值相关性都在0.96以上，两种测定体系相关性为0.9585。整个反应体系反应时间短，避免了放射性污染，延长了试剂效期，灵敏度高，测试结果准确，简化了实验操作流程。

技术领域

本发明涉及一种检测试剂盒，具体为一种磁微粒化学发光法测定地高辛含量的试剂盒及其检测方法。

背景技术

地高辛在治疗心力衰竭和控制快速心室率是临床首选的有效药物，但是有效血药浓度窄，基于“2008欧洲心脏学会关于急慢性心脏疾病诊断指南”中的相关内容，推荐的地高辛治疗浓度为0.6-1.2ng/ml，当地高辛浓度超过1.2ng/ml时，死亡风险上升。此外，治疗指数低、毒副作用大且个体差异大，给予常规剂量也可能导致中毒或达不到有效剂量，也使临床难以掌握地高辛用药剂量。故血清地高辛浓度检测是常用的一项治疗药物监测(TDM)，通过测定血液或其它体液中药物的浓度，获得有关药动学参数，从而实施给药方案个体化，在提高药物疗效的同时也减少了不良反应的发生。监测血药浓度可找出药物在治疗过程中的疗效及毒副作用的定量标准，以调整临床用药剂量和给药方案，保证病人用药的安全有效。

地高辛血药浓度常用检测方法主要包括液相-质谱联用分析法、放射免疫、酶联免疫吸附分析法、磁微粒化学发光免疫，这些方法各有特点。

液相-质谱联用分析法的检测结果较为准确，样品的预处理步骤较为简便，但所需孵育的时间较长，操作中人为干扰的因素占据大部分，酶的稳定性也会因温度、pH值等受到影响。液相-质谱联用分析法具有快速、准确等优点，其所需血量较小，高灵敏度及专属性，交叉反应发生率极低。但由于该类仪器价格较为昂贵，维护费用极高，检测成本大，因此其临床应用受到限制。

放射免疫分析法主要优势在于价格低廉、方法简单、结果可信且灵敏度较高，但由于其放射性污染较大，试剂有效期短，检测周期长等使得该方法下的地高辛测定结果在动态观察时可比性降低，较难用于临床的即时测定。

酶联免疫吸附分析法虽然试剂稳定，但是由于采用显色的方法进行判定，因此存在灵敏度低，线性范围窄等缺点，尤其是灵敏度低这个缺点，使其不适合进行对浓度较低的药物进行定量分析。

磁微粒化学发光法，不但有放免的优点，还有效避免了放免的缺点，例如可以通过对磁珠-抗体-抗原复合物的清洗降低样本中其他成分非特异性吸附的影响，有效提高灵敏度，其次，通过将样本的浓度信号转化为发光信号，其灵敏度能够达到或者超过放免的水平，而且试剂没有放射性污染，易于操作，反应时间短，检测结果准确。

通过上述比较，不难看出最适合对地高辛血药浓度进行监测的方法就是化学发光法。正因为如此，国内外针对此项目均为磁微粒化学发光法，这其中包括罗氏、雅培、西门子、新产业等，由于地高辛是小分子物质，如果要进行免疫检测就需要将地高辛或其衍生物用于固相或发光物的连接。根据说明书描述得知，罗氏是生物素偶联地高辛衍生物用于固相，雅培和西门子是吖啶酯标记地高辛或其衍生物用于发光，新产业是ABEI标记地高辛，上述均为直接发光体系。因此，开发地高辛检测试剂盒的关键在于合适的地高辛衍生物的制备。鉴于国内化学发光大多数采用碱性磷酸酶(ALP)或者辣根过氧化物酶(HRP)的发光系统(酶促化学发光)，而固相有些公司采用生物素-链霉素磁珠、FITC-抗FITC磁珠体系，有些公司采用磁珠直接包被的系统。在这种情况下，我们就需要地高辛衍生物上的基团既可以偶联生物素、FITC或者磁珠等用于磁微粒体系的固相偶联，又可以偶联酶(ALP或HRP)等用于发光标记，极大的提升了建立反应体系的灵活性。