[发明专利]黑树莓提取物在制备治疗宫颈炎、宫颈糜烂药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体地涉及黑树莓提取物(BRBE)的医药用途。

背景技术

宫颈癌是比较常见的妇科恶性肿瘤，医学调查发现，宫颈癌已经是一类非常严峻的疾病，对女性危害很大，而且近几年发病率还在不断上升。2016年，全世界宫颈癌年发病50万例，死亡率13.15万例，中国，年发病为26.6万例，死亡3.3万例。在中国，宫颈癌是女性常见癌瘤，占全身恶性肿瘤11％，九大肿瘤之一，女性第二位。占女性癌瘤死亡的18.39％(仅次于胃、食管、肝癌之后)。发病率分布：农村高于城市区；山村高于平原地区；内地(130/1万)发病高于沿海(5-6/10万)，其年龄特点：小于20岁少见，40至60岁高峰。高发地区70岁仍多见，年轻化趋向(HPV、多因素影响)。

目前，治疗癌症的常用方法有手术、放疗和药物治疗等。但是在子宫颈抹片筛检普及的国家，癌前病变(鳞状上皮内病变)以及早期子宫颈癌的诊断较多，是以发生率高而死亡率低。所以在女性宫颈糜烂阶段开始介入的早诊早治手段，对于预防宫颈癌的发生具有一定意义。

黑树莓是蔷薇科悬钩子属的多年生落叶半灌性果树，果实中含有种类繁多的生物活性的化学物质，其生物学功能在消化道肿瘤防治应用中已见报道。现有技术中，并未有黑树莓或其提取物在宫颈炎、宫颈糜烂预防和治疗中的相关的报道。

发明内容

本发明的目的是提供黑树莓提取物(BRBE)的医药用途，即黑树莓提取物在制备治疗宫颈炎、宫颈糜烂药物中的应用。

本发明中，黑树莓提取物可以单用或与药学上可接受的其他天然或合成药物联合在制备治疗宫颈炎、宫颈糜烂及宫颈上皮增生药物制剂中的应用。

优选的，所述的药物制剂为阴道内给药制剂。更优选的，所述的阴道内给药制剂选自阴道栓剂、锭剂、膜剂、霜剂、片剂、溶液剂、凝胶剂、胶囊剂和泡沫剂。

本发明中，黑树莓提取物的总有效剂量为0.5-1g/kg/天。

本发明所提供的宫颈炎、宫颈糜烂药物制剂中，BRBE可与目前市场上的任何化疗药、生物制剂，包括激素类、烷化剂类、铂类、抗代谢类、拓扑异构酶抑制剂类、抗微丝微管类、诱导分化类、抗肿瘤生长类、提高机体免疫类及其他药物，制备成复方制剂。

本发明通过对体外多种人宫颈肿瘤细胞及体内肿瘤动物模型的抗癌实验研究，发现BRBE对体内外肿瘤细胞具有较好的抑制作用，对于宫颈癌的防治有着非常显著的效果。

具体实施方式

实施例1黑树莓提取物(BRBE)的制备

1)将冷冻干燥的黑树莓粉(50克)，在35℃用200mL乙醇-水(75:25，v/v)萃取3小时，搅拌直到粉末变白，得粗提取物。将获得的粗提取物通过Whatman 4号滤纸，收集滤液，冷冻干燥，得提取物，备用。

2)将提取物再次悬浮在200mL含有0.1％HCl的甲醇(也可以采用水)中，然后加入到聚酰胺柱上进行色谱分离(60X800mm，200g)，分别使用10％，30％，50％，70％和90％乙醇(含1％甲酸)作为洗脱剂，基于TLC分析，分别得到A、B、C、D和E 5份级份样品，真空下干燥，然后将级份A、B、C和D样品进一步经Sephadex LH-20(20X720mm)层析，用甲醇洗脱分别得到A-1、B-1、C-1和D-1四个级份样品。将A-1、B-1、C-1和D-1四个级份样品通过制备型HPLC-MS/MS进一步纯化分析，流动相由乙腈(ACN)和水(1％甲酸)线性梯度洗脱：0-8分钟，10％ACN；8-60分钟，10-20％ACN。流速设定为3.00毫升/分钟，注射量为100μL，柱温保持在25℃，洗脱后分别得到A-2、B-2、C-2和D-2。其中B-2通过分离得到化合物3(7mg，t R 2.97min)，并且经鉴定为原儿茶酸。糖主要在A(5.56克)中残留，原儿茶酸主要浓缩在组分B(5.27g)中；C(3.54g)和D(3.83g)含有黄烷醇。以提取物B-2进行以下实验。

实施例2黑树莓提取物(BRBE)在体外抑制人宫颈癌细胞生长

使用5种人恶性宫颈肿瘤(HeLa、CasKi、siH，HT-3，C-33A)细胞系，采用MTT法测定了BRBE体外抗癌活性，测定浓度范围为0-500μg/ml，处理时间为48h，结果见表1。

表1 BRBE对5种人宫颈肿瘤细胞IC50(μg/ml)(M±SE)