[发明专利]一种同时检测呼出气冷凝液中的硝酸盐和亚硝酸盐的方法

说明书

本发明设计了一种直接同时检测呼出气冷凝液中硝酸盐和亚硝酸盐的方法。本方法以热解吸离子迁移谱为基础，将采集的呼出气冷凝液加入磷酸酸化后，滴在热解吸载体上进行热解吸检测，由于硝酸，亚硝酸和基质解吸时间和迁移率的不同，实现复杂生物样品中硝酸盐和亚硝酸盐的同时快速检测。

技术领域

本发明涉及一种同时检测硝酸盐和亚硝酸盐的方法，具体来说是一种用热解吸离子迁移谱同时检测呼出气冷凝液中硝酸盐和和亚硝酸盐的方法。

背景技术

呼出气冷凝液(EBC)中的的硝酸盐和亚硝酸盐可以作为生物标志物来辅助疾病诊断。

例如EBC中亚硝酸盐的含量的升高与哮喘、囊状纤维症、慢性阻塞性肺病、急性胃损失等多种疾病密切有关。而硝酸盐的含量的升高则与哮喘和社区获得性肺炎密切相关，在慢性阻塞性肺病中，硝酸盐的含量则不升高。因此，对于不同的疾病，硝酸盐和亚硝酸盐的同时检测，可以帮助医生更准确的诊断疾病。

目前文献报道的EBC中亚硝酸盐和硝酸盐常用的检测手段有比色法、吸光光度法和荧光法。比色法和吸光光度法检测亚硝酸盐一般是在弱酸环境下，向样品中加入对氨基苯磺酸，对亚硝酸盐进行重氮化，得到重氮盐，再将重氮盐与盐酸奈乙二胺偶合后，生产红色的配合物，测定其吸光度或者用比色法鉴定。

而荧光法检测亚硝酸盐是酸性条件下，使亚硝酸根与2,3-二氨基萘反应生成1(H)-naphtotriazole，然后进行荧光检测。

上面的两种方法操作繁琐，且只能检测样品中的亚硝酸盐，如果需要检测硝酸盐，则需要先将样品中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，然后测得样品中硝酸盐和亚硝酸盐的总量，再测得亚硝酸盐的含量，两者相减得到硝酸盐的含量。此外使用光度法时还会受到基质颜色的干扰。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种简单、快速、可同时检测呼出气冷凝液样品中的硝酸盐和亚硝酸盐的方法。

为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：

离子迁移谱包括离子迁移管、热解吸进样器、气源系统、控制系统和信号输出系统。气源系统作用是使将空气或氮气用分子筛和活性炭后提供载气和漂气。

热解吸载体为一个带有凹槽的耐酸腐蚀的四氟或PEEK制成的平板。

向0℃以下采集的呼出气冷凝液加入质量浓度0.1％～10％的磷酸、质量浓度0.1％～10％的硫酸溶液中的一种或二种；酸溶液与呼出气冷凝液的体积比为1:1000～1:10，震荡混合均匀。然后用移液枪吸取1～100L的样品，滴入热解吸载体的凹槽中。

热解吸进样器包括热解吸腔体以及加热模块，加热模块可以将热解吸腔体内温度保持在100～250℃。检测呼出气冷凝液时，将滴加过呼出气冷凝液样品的热解吸载体插入到热解吸腔体中，此时热解吸载体以及凹槽中的样品的温度可以被逐渐加热到100～250℃，呼出气冷凝液中的成分根据挥发性的不同依次挥发出来：亚硝酸盐以亚硝酸的形式首先挥发出来，水分和样品中的基质也逐渐挥发出来，使得样品中的氢离子被浓缩，最后使硝酸盐以硝酸的形式挥发出来，从而可以实现呼出气冷凝液中硝酸盐和亚硝酸盐的时间分辨热解吸，同时用载气将挥发出来的气体载带入离子迁移谱的反应区进行电离和检测。

本发明的优点：

本发明中的方法，一次检测即可同时实现呼出气冷凝液样品中硝酸盐和亚硝酸盐的同时检测，不需要对样品进行复杂的衍生化处理，可以有效的消除样品中基质的干扰，所需样品量少，操作简单快速，灵敏度高。

附图说明

图1为本发明的热解吸进样载体示意图。

图2为一次呼出气冷凝液检测过程中的硝酸盐、亚硝酸盐和水的信号强度随时间变化的曲线。