[发明专利]一种抗凝血苹果花有效成分及其提取分离方法、应用

说明书

本发明公开了一种抗凝血苹果花有效成分的提取分离方法，包括以下步骤：将苹果花粉碎后用石油醚脱脂，然后用乙醇浸泡提取，得到乙醇总浸膏；将乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位；将正丁醇部位采用200~300目硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷‑甲醇进行梯度洗脱，得到6个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分1~6，将组分2经硅胶H柱色谱分离，以二氯甲烷‑甲醇进行梯度洗脱，然后经Sephadex LH‑20凝胶柱色谱纯化，得到化合物1。本发明采用特殊的方法从苹果花的正丁醇部位中分离得到1个具有抗凝血活性的化合物，可用于抗凝血剂。

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种抗凝血苹果花有效成分及其提取分离方法、应用。

背景技术

苹果（Malus pumila Mill）为蔷薇科（Rosaceae）苹果属植物，在世界各地广泛种植数百年。目前，苹果的研究主要集中在果实、果皮、叶片和枝条上。研究结果表明，其果皮中含有三萜类，黄酮类，酚类和其他成分，如烷基醇，并表现出更强的抗氧化活性和抗增殖活性。其果实中含有黄酮类、多酚类、糖苷类、三萜类、甾体类和脂肪酸酯类，具有抗氧化活性。苹果叶中含有高水平的多酚、黄酮类，并具有很好的体外抗氧化活性和利血平引起的小鼠胃溃疡的保护作用。然而，苹果花的化学成分和药理作用仍然不确定，没有明确的理论证据。

血栓形成涉及血管系统局部血液凝结，经常导致严重的健康相关疾病，如心脏病发作和中风等。血栓形成的危险因素有异常的高脂血症，高血糖，血浆纤维蛋白原升高，高血压和癌症，这些血栓性疾病已成为死亡的主要原因，并且其发病率每年都在增加。近几十年来，用肝素，华法林等药物达到了防治血栓的目的，但肝素易引起自发性出血，表现为各种粘膜出血，关节出血，伤口出血等。另外，肝素诱导的血小板减少症是药物引起的血小板减少症，是肝素治疗的严重并发症。因此，这些缺点已经迫使研究者发现与肝素相比副作用较小的新型抗血栓和抗凝剂。

凝血的实质是呈水溶性的纤维蛋白原转变为水中不溶解的固态纤维蛋白的过程，是在内源性或（和）外源性凝血途径下产生凝血酶原激活物，在凝血因子的作用下产生凝血酶，最后在凝血酶的作用下使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。PT主要反映的是外源性凝血途径中凝血因子I、II、V、VII、X的活性；APTT主要反映内源性凝血系统状况，与VIII、X、XI、XII等内源性凝血因子活性有关；TT值是主要反映纤维蛋白原转变为纤维蛋白程度的重要指标；FIB主要反映纤维蛋白原的含量。

发明内容

基于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种抗凝血苹果花有效成分，并提供该抗凝血苹果花有效成分的提取分离方法和应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种抗凝血苹果花有效成分的提取分离方法，包括以下步骤：

1）以干燥的苹果花为原料，粉碎后用石油醚脱脂，得到脱脂后的苹果花；将脱脂后的苹果花采用乙醇浸泡提取，减压回收溶剂，得到乙醇总浸膏；将乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，减压回收溶剂后，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位；

2）将步骤1）所得正丁醇部位采用200~300目硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，得到6个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分1~6，将组分2经硅胶H柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，然后经Sephadex LH-20凝胶柱色谱纯化，薄层色谱检测、合并，浓缩、干燥，得到化合物1；

化合物1即为抗凝血苹果花有效成分。

优选地，步骤1）中所述石油醚脱脂的具体步骤为：室温下，将粉碎后的苹果花浸泡于石油醚中，浸泡脱脂2~4次，每次2~4天，浸泡脱脂完成后，固液分离，取固体挥发干石油醚，即得脱脂后的苹果花。