[发明专利]一种促凝血苹果花有效成分及其提取分离方法、应用

说明书

本发明公开了一种促凝血苹果花有效成分的提取分离方法，包括以下步骤：将苹果花粉碎后用石油醚脱脂，然后用乙醇浸泡提取，得到乙醇总浸膏，将乙醇总浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得到乙酸乙酯部位；将乙酸乙酯部位经大孔树脂吸附上样，用水和乙醇梯度洗脱，得到60%乙醇提取物和90%乙醇提取物；将60%乙醇提取物和90%乙醇提取物分别进一步分离纯化，得到化合物1~4，分别为根皮苷、山奈酚、根皮素和β‑谷甾醇。本发明采用特殊的方法从苹果花中乙酸乙酯部位分离得到了4个化合物，并对4个化合物的体外促凝血效果的考察，结果表明，4个化合物均具有良好的促凝血效果，它们可以单独或组合用于制备促凝血剂。

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，具体涉及一种促凝血苹果花有效成分及其提取分离方法、应用。

背景技术

苹果（Malus pumila Mill）为蔷薇科（Rosaceae）苹果属植物，在世界各地广泛种植数百年。目前，苹果的研究主要集中在果实、果皮、叶片和枝条上。研究结果表明，其果皮中含有三萜类，黄酮类，酚类和其他成分，如烷基醇，并表现出更强的抗氧化活性和抗增殖活性。 其果实中含有黄酮类、多酚类、糖苷类、三萜类、甾体类和脂肪酸酯类，具有抗氧化活性。苹果叶中含有高水平的多酚、黄酮类，并具有很好的体外抗氧化活性和利血平引起的小鼠胃溃疡的保护作用。然而，苹果花的化学成分和药理作用仍然不确定，没有明确的理论证据。

血液凝固简称凝血，是在内源性或（和）外源性凝血途径下产生凝血酶原激活物，凝血酶原激活物在凝血因子的作用下产生凝血酶，最后凝血酶使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，血液由溶胶状态转变为凝胶状态。凝血过程通常分为：①内源性凝血途径；②外源性凝血途径；③共同凝血途径。外源性凝血途径是从组织因子暴露于血液而启动，到因子X被激活的过程；临床上以凝血酶原时间(PT)测定来反映外源性凝血途径的状况。内源性凝血途径是指从因子XII激活，到因子X激活的过程；临床上以活化部分凝血活酶时间（APTT）来反映体内内源性凝血途径的状况。从因子X被激活至纤维蛋白形成，是内、外源共同凝血途径；主要包括凝血酶生成和纤维蛋白形成两个阶段。

机体凝血系统包括凝血和抗凝两个方面，两者间的动态平衡是正常机体维持体内血液流动状态和防止血液丢失的关键。促凝血药主要通过增强体内凝血因素或抑制抗凝血因素，促使凝血，以达到凝血目的，用于治疗各种出血疾病以及创伤性出血等。

发明内容

基于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种促凝血苹果花有效成分，并提供该促凝血苹果花有效成分的提取分离方法和应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种促凝血苹果花有效成分的提取分离方法，包括以下步骤：

1）以干燥的苹果花为原料，粉碎后用石油醚脱脂，得到脱脂后的苹果花；将脱脂后的苹果花采用乙醇浸泡提取，减压回收溶剂，得到乙醇总浸膏；将乙醇总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，减压回收溶剂后，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位；

2）将步骤1）所得乙酸乙酯部位用体积浓度为65~75%的乙醇溶解后，D101大孔树脂吸附上样，静置12~14 h，依次用水、30%乙醇、60%乙醇和90%乙醇进行梯度洗脱，每个比例溶剂至少洗脱3个柱体积，减压回收溶剂后，得到水提物、30%乙醇提取物、60%乙醇提取物和90%乙醇提取物；

3）将60%乙醇提取物的第一柱体积和第二柱体积合并在一起，采用两次硅胶H常压柱色谱分离，第一次用二氯甲烷-丙酮进行梯度洗脱，第二次用二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，得到3个组分，按照所得组分极性由小到大依次标记为组分1、组分2、组分3；组分3先经Sephadex LH-20凝胶柱色谱纯化，后经中压液相制备色谱，收集最高峰，浓缩、干燥，得到化合物1；