[发明专利]一种防止荧光淬灭的封片剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学，具体为一种防止荧光淬灭的封片剂的制备方法。

背景技术

组织切片、细胞爬片或血液涂片制作的最后一步常需用封片剂将其封固，再盖上盖玻片，从而防止标本氧化、褪色，能长期保存，并有利于在显微镜下观察。封片剂主要分为脂溶性封片剂和水溶性封片剂两种。脂溶性封片剂（如：中性树胶）黏性强，固定作用好，适用于经二甲苯处理的标本；水溶性封片剂（如：甘油）适用于水洗的标本。

在生物医学实验中，经常使用荧光染料对组织或细胞中的特定成分进行标记，并通过荧光显微镜的激发光，使其呈现出荧光。在此过程中需要用水溶性封片剂对标本进行封片。但水溶性封片剂黏性弱，盖玻片容易发生移位，不能很好地固定在标本上。而且荧光容易淬灭，经荧光标记的样本不能长时间保存。

发明内容

本发明的目的在于克服上述背景技术困难，提供一种防止荧光淬灭的封片剂的制备方法。

为达到上述目的，采用的技术方案为：一种防止荧光淬灭的封片剂的制备方法，包含如下步骤：

1）. 配制1mol/L Trizma Base：取12.11g Trizma Base溶于100ml去离子水，备用；

2）. 配制1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O：取15.62g NaH₂PO₄·2H₂O溶于100ml去离子水，备用；

3）. 配制Tris-磷酸盐缓冲液：取1mol/L Trizma Base 50ml，用1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O调节pH至7.6，备用；

4）. 配制50%甘油：取甘油100ml，加入100ml去离子水，充分混匀，高压灭菌，备用；

5）. 封片剂配制：

a. 取上述步骤1）配制好的Tris-磷酸盐缓冲液5ml和75ml去离子水充分混合；

b. 往步骤a制备的混合溶液中加入20g聚乙烯醇，充分搅拌混合，用保鲜膜密封，放置60℃水浴过夜；

c. 取三氯叔丁醇100mg与步骤4）制备的50%甘油30ml充分搅拌混合；

d. 将步骤c制备的溶液缓慢加入到步骤b制备的溶液中，一边加一边混匀；

e. 混合后的液体用保鲜膜密封，并用锡箔纸包裹避光，4℃保存，即成。

上述步骤5）b中，聚乙烯醇的醇解度为87%-90%，分子量为30,000-70,000。

采用上述方案的有益效果为：本发明制备的防止荧光淬灭的封片剂，制备方法简单，抗荧光淬灭的效果明显优于市面所售相关产品，样本在4℃保存两个月以内，荧光强度仍可维持在初始水平。该封片剂可用于自身发荧光的样本，也可用于经荧光染料染色后的样本的封片。该封片剂对所有荧光染料都有很好的相容性，包括：FITC，Texas Red，AMCA，cy3，cy5，Alexa Fluor 488/549等。该封片剂不仅可以用于荧光显微镜的观察，也可用于激光共聚焦显微镜的观察。该封片剂可用于冰冻切片、石蜡切片、细胞爬片和血液涂片等样本的封片。

具体实施方式

下面结合实施例进一步介绍本发明，但本发明不仅限于下述实施例，可以预见本领域技术人员在结合现有技术的情况下，实施情况可能产生种种变化。

一种防止荧光淬灭的封片剂的制备方法，包含如下步骤：

1）. 配制1mol/L Trizma Base：取12.11g Trizma Base溶于100ml去离子水，备用；

2）. 配制1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O：取15.62g NaH₂PO₄·2H₂O溶于100ml去离子水，备用；

3）. 配制Tris-磷酸盐缓冲液：取1mol/L Trizma Base 50ml，用1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O调节pH至7.6，备用；

4）. 配制50%甘油：取甘油100ml，加入100ml去离子水，充分混匀，高压灭菌，备用；

5）. 封片剂配制：