[发明专利]一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学，具体为一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法。

背景技术

在生物医学实验中，经常需要用荧光染料对细胞和组织中的特异成分进行染色，然后在荧光显微镜下观察。并且，几乎所有样本的荧光标记都会对细胞核进行染色。目前普遍采用的实验方法是依次对细胞中的特异成分和细胞核进行标记，用封片剂封片后，在荧光显微镜下观察。每一种荧光标记后都需要多次洗涤，步骤繁琐，也耗费不少时间。由于荧光容易淬灭，荧光标记操作时间越短越好，因此很有必要找到一种缩短荧光染色的方法。

发明内容

本发明的目的在于克服上述背景技术困难，提供一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法。

为达到上述目的，采用的技术方案为：

一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法，包含如下步骤：

1). 配制1mol/L Trizma Base：取12.11g Trizma Base溶于100ml去离子水，备用；

2). 配制1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O：取15.62g NaH₂PO₄·2H₂O溶于100ml去离子水，备用；

3). 配制Tris-磷酸盐缓冲液：取1mol/L Trizma Base 50ml，用1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O调节pH至7.6，备用；

4). 配制50%甘油：取甘油100ml，加入100ml去离子水，充分混匀，高压灭菌，备用；

5). 封片剂配制：

a. 取上述配制好的Tris-磷酸盐缓冲液5ml和75ml去离子水充分混合；

b. 向步骤a制备的混合溶液中加入20g聚乙烯醇，充分搅拌混合，用保鲜膜密封，放置60℃水浴过夜；

c. 取三氯叔丁醇100mg与50%甘油30ml充分搅拌混合；

d. 取DAPI 0.1mg加入步骤c的溶液中，充分混匀；

e. 将步骤d溶液缓慢加入步骤b溶液中，一边加一边混匀；

f. 混合后的液体用保鲜膜密封，并用锡箔纸包裹避光，4℃保存，即成。

上述步骤5）b中，聚乙烯醇的醇解度为87%-90%，分子量为30,000-70,000。

采用上述方案的有益效果为：本发明制备的可同时标记细胞核的封片剂，省去了染色和洗涤的步骤，能有效简化实验流程，节约时间成本，提高工作效率。该封片剂可用于冰冻切片、石蜡切片、细胞爬片和血液涂片等样本的细胞核标记及封片。该封片剂不仅可以用于荧光显微镜的观察，也可用于激光共聚焦显微镜的观察。

具体实施方式

下面结合实施例进一步介绍本发明，但本发明不仅限于下述实施例，可以预见本领域技术人员在结合现有技术的情况下，实施情况可能产生种种变化。

一种可同时标记细胞核的封片剂的制备方法，包含如下步骤：

1). 配制1mol/L Trizma Base：取12.11g Trizma Base溶于100ml去离子水，备用；

2). 配制1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O：取15.62g NaH₂PO₄·2H₂O溶于100ml去离子水，备用；

3). 配制Tris-磷酸盐缓冲液：取1mol/L Trizma Base 50ml，用1mol/L NaH₂PO₄·2H₂O调节pH至7.6，备用；

4). 配制50%甘油：取甘油100ml，加入100ml去离子水，充分混匀，高压灭菌，备用；

5). 封片剂配制：

a. 取上述配制好的Tris-磷酸盐缓冲液5ml和75ml去离子水充分混合；

b. 向步骤a制备的混合溶液中加入20g聚乙烯醇，充分搅拌混合，用保鲜膜密封，放置60℃水浴过夜；

c. 取三氯叔丁醇100mg与50%甘油30ml充分搅拌混合；

d. 取DAPI 0.1mg加入步骤c的溶液中，充分混匀；

e. 将步骤d溶液缓慢加入步骤b溶液中，一边加一边混匀；