[发明专利]一种快速测定牛奶中黄曲霉毒素M1含量的方法

说明书

（一）技术领域

本发明涉及检测技术领域，特别涉及一种快速测定牛奶中黄曲霉毒素M1含量的方法。

（二）背景技术

黄曲霉毒素M1简称AFM1，目前AFM1 的检测方法主要有色谱法(包括薄层色谱法和高效液相色谱法)、免疫化学法(包括免疫亲和柱法、酶联免疫法、放射免疫法和胶体金法)、电化学方法、化学发光及各种方法之间的联用。薄层层析法和液相色谱法存在检测周期长、程序复杂、所需试剂繁多，且难以定性等缺点，酶联免疫法虽然操作简便，但容易产生假阳性现象，仅适用于批量筛选超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中黄曲霉毒素B1和M1的方法研究。超高效液相质谱联用仪灵敏度和选择性高，适用于AFM1检测，是目前实验室常用方法，但是前期需用免疫亲和柱处理，程序复杂且成本高。

（三）发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种快速测定牛奶中黄曲霉毒素M1含量的方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种快速测定牛奶中黄曲霉毒素M1含量的方法，其特征在于：称取AFM1标准品溶于有机溶剂中，分别配置一系列已知浓度的AFM1标准曲线系列工作液，将该AFM1标准曲线系列工作液进行液相色谱-质谱/质谱仪分析，得到以AFM1的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标的标准曲线及线性回归方程；将待测样品处理后进行HPLC-MS/MS分析，得到样品中AFM1的峰面积，将峰面积带入上述线性回归方程后得到相应的AFM1的质量浓度。

其中，AFM1标准曲线系列工作液配置方法为：分别准确吸取标准工作液Ⅱ于容量瓶中，用初始流动相定容至刻度，配制一系列已知浓度的AFM1标准曲线系列工作液。

进一步所述标准工作液Ⅱ的配置方法为：取AFM1 1.0mL，用乙腈溶解并定容至10mL；将溶液转移至棕色试剂瓶中，在-20℃下避光密封保存，即浓度为1.0 μg/mL的AFM1标准储备溶液；准确吸取AFM1标准工作溶液500μL至10mL容量瓶中，乙腈定容，现配现用。

其中，称取一定量所述待测样品，加5mL 0.1%甲酸乙腈，具体为将甲酸加入到乙腈中，甲酸占乙腈的体积百分比为0.1%，涡旋1min，加入提取包，涡旋1min，-4℃用10000rpm离心机进行离心5min，取上清液1.25mL加入净化包，然后手摇1min，使用12000rpm离心机进行离心3min，上清液过0.22μm尼龙膜，待测分析。

上述液相色谱-质谱/质谱仪配有电喷雾离子源。

其中液相色谱采用BEH C18色谱柱；流动相：A：0.1%甲酸水溶液，B：乙腈。梯度洗脱条件见下表1。色谱柱柱温40℃；进样量0.5μL。

上述BEH C18色谱柱长度为50mm，直径为1.7μm。

其中，质谱采用正电子电离方式，扫描范围50-400m/z，喷雾电压为3.5kV，雾化气压为40 psi，干燥气流速为6mL/min，温度为550℃，碰撞气为氩气。

本发明的有益效果是：本发明在前处理中避开了免疫亲和柱，降低了检测成本还可以快速、准确的对AFM1进行检测，基于该方法，本文选择了固体分散萃取材料，使得操作更加方便快捷，结合超高效液相色谱／串联质谱技术对AFM1进行直接分析测定结果更加准确快速。

（四）具体实施方式

实施例1

称取AFM1标准品溶于有机溶剂中，分别配置一系列已知浓度的AFM1标准曲线系列工作液，将该AFM1标准曲线系列工作液进行液相色谱-质谱/质谱仪分析，得到以AFM1的质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标的标准曲线及线性回归方程；将待测样品处理后进行HPLC-MS/MS分析，得到样品中AFM1的峰面积，将峰面积带入上述线性回归方程后得到相应的AFM1的质量浓度。所述有机溶剂为乙腈。

实施例2

实施例1中一系列已知浓度的AFM1标准曲线系列工作液配置方法具体为：

（1）AFM1标准储备溶液（1.0 μg/mL）：取AFM1 1.0mL，用乙腈溶解并定容至10mL。将溶液转移至棕色试剂瓶中，在-20℃下避光密封保存。AFM1标准品：纯度≥99%。

（2）AFM1标准工作溶液Ⅱ（0.05 μg/mL）：准确吸取AFM1标准工作溶液（1.0 μg/mL）500μL至10mL容量瓶中，乙腈定容，现配现用。