[发明专利]一种外泌体‑核酸适配体脂质体复合载药系统及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及癌症的靶向给药系统技术领域，具体涉及一种外泌体-核酸适配体脂质体复合载药系统及其制备方法和应用。

背景技术

近年来纳米药物载体的开发和研究受到了广泛的关注。纳米药物载体具有很多优势，例如：纳米颗粒易于制备、修饰加工且可控性好，可保护药物、基因或功能性分子免受机体或一些酶类的降解作用等。某些纳米颗粒在充当“载体”角色的同时，还具有免疫佐剂的功能。

脂质体是一种人工囊泡结构，脂质体在水中时，磷脂分子的亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，直径可以控制在25～1000nm范围内，制备脂质体时通常会掺杂一定质量的胆固醇，使其结构稳定。由于脂质体优良的亲水和疏水性能，因此可以作为基因、蛋白以及小分子药物载体。利用天然脂质体作为药物载体时具有以下几方面的优势：尺寸可控，操作简单；成本低，废物少；载药效率高，可载亲水、疏水药物。然而，天然脂质体缺少功能，而人工合成的脂质体虽然便于修饰功能基团，但成本大幅增加，且合成过程也更加繁琐。

适配体是一类经筛选得到的单链DNA或RNA，通过三维结构以高亲和力特异性结合在靶标上，又被称作“化学抗体”。和单克隆抗体相比，适配体分子量小、易于修饰合成、低毒低免疫原性、组织渗透性强等，因此，适配体被广泛应用于药物靶向治疗及肿瘤检测等领域。

外泌体(Exosome)是由多种活细胞分泌的囊泡小体，其中含有蛋白质和RNA等多种关键组分，外泌体在多种生理和病理工程中发挥着重要作用，包括恶性肿瘤。对于一些疾病，尤其是当今对人类威胁最大的恶性肿瘤，药物的靶向运输以及肿瘤的抗药性始终是临床的难题。

发明内容

针对以上背景技术中提到的不足和缺陷，本发明的目的在于，提供一种靶向性好、免疫逃避性好的外泌体-核酸适配体脂质体复合载药系统，并且提供了一种上述复合载药系统的制备方法及其应用。

为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：

一种外泌体-核酸适配体脂质体复合载药系统，包括抗肿瘤药物，所述抗肿瘤药物的表面包覆有纳米脂质体，所述纳米脂质体的表面通过化学键连接有核酸适配体，形成负载抗肿瘤药物的核酸适配体脂质体，所述负载抗肿瘤药物的核酸适配体脂质体上复合有外泌体。

肿瘤细胞来源的外泌体可以通过DC介导的免疫反应起到抑制肿瘤生长的作用；并且，由于外泌体直径较小，可透过血脑屏障进入脑部血循环，外泌体可以将抗肿瘤的RNA和蛋白质带入，对脑部原发性肿瘤发挥治疗作用。与肿瘤的免疫细胞治疗相比，外泌体具有明显优势，在肿瘤细胞的微酸性环境下，免疫细胞无法充分发挥其作用。对于外泌体而言，酸性环境更有助于外泌体被肿瘤细胞吸收摄取，以进一步发挥外泌体的抗肿瘤性能。但是，外泌体本身不具备靶向性，限制了其抗肿瘤治疗效果。本发明首次将外泌体与表面通过化学键连接核酸适配体的脂质体相复合，形成“外泌体-核酸适配体-脂质体”的复合载药系统。采用纳米脂质体包覆抗肿瘤药物，在纳米脂质体的表面通过化学键连接核酸适配体，并且在核酸适配体脂质体上复合外泌体，得到外泌体-核酸适配体脂质体的复合体，作为复合载药系统。将外泌体和核酸适配体与脂质体复合，核酸适配体脂质体提高了外泌体的靶向性，通过外泌体、核酸适配体、脂质体之间的协同作用，使所得复合载药系统具有良好的靶向性和免疫逃避性，形成对癌细胞具有靶向识别功能且具有强大杀伤力的抗癌药物体系。可将其应用于癌症患者的抗癌药物化疗，大大提高抗癌药物疗效，降低由于药物耐药性而导致的低化疗效果和复发，改善目前癌症病人化疗的瓶颈问题，在强化癌症治疗效果方面具有巨大的应用价值。

作为优选的方案，所述外泌体可以是由各种癌细胞培养后提取得到的外泌体，如A549细胞、MCF7细胞或Hep2细胞。

作为优选的方案，所述外泌体通过与负载抗肿瘤药物的核酸适配体脂质体混合后，经多次冻融反应，融合在负载抗肿瘤药物的核酸适配体脂质体上。

作为优选的方案，所述复合载药系统呈颗粒状，其粒径为100nm～150nm。

作为优选的方案，所述核酸适配体为核酸适配体AS1411、核酸适配体S6、核酸适配体sgc8、核酸适配体A10、核酸适配体S2.2或核酸适配体TLS11a中的任意一种。

作为优选的方案，所述抗肿瘤药物为阿霉素、氟尿嘧啶、奥沙利铂、卡铂、环磷酰胺、长春碱、阿糖胞苷、氮芥、塞替派、甲氨蝶呤、替加氟、丝裂霉素和柔红霉素中的任意一种。

作为优选的方案，所述纳米脂质体包括磷脂、胆固醇类成分和功能性磷脂。