[发明专利]R6GHO的制备及其化学发光分析方法的建立

说明书

技术领域

本发明属于化学发光分析领域，涉及R6GHO的制备工艺以及基于罗丹明6G酰肼草酰胺(R6GHO)对亚硝酸盐的高选择性，从而建立了一种化学发光测定亚硝酸盐的新方法。

背景技术

化学发光是指某些化学反应中发出可见光的现象。其发光机理是反应体系中的某些物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁至激发态，然后再从激发态返回基态，同时将能量以光辐射的形式释放出来，产生化学发光。最早发现的化学发光现象发生在生物体内，如萤火虫，现在称之为生物发光，是由生物体发出的可见光而得名。到了19世纪后期，人们发现简单的非生物有机化合物也能产生化学发光现象。但早期的化学发光研究进展一直比较缓慢，几乎没有获得实质性的应用。直到出现商品化的化学发光测试装置化学发光分析便得到迅速的发展，直至现在，化学发光分析的研究和应用仍然是痕量分析领域的一个十分重要的研究方向。

几十年来人们已经开发出了一系列化学发光体系，典型的有基于鲁米诺及其衍生物(环状二羧酸酰肼类)、过氧草酸酯、吖啶类化合物、联吡啶钌、多酚类、高锰酸钾等化学发光体系。可是，这几种试剂的化学发光体系所能测定的对象很有限，并且他们测定的选择性比较低。由于这些原因，开发新型化学发光体系对于促进化学发光分析法的进步具有重要意义。

罗丹明类荧光分子因具有良好的光稳定性、对pH不敏感、长波长发射和高量子产率等优点已成为最重要的荧光母体之一。作为重要的荧光材料，罗丹明类荧光分子是以氧杂蒽为母体的碱性吨染料，其羧基可与伯氨反应生成独特的五元环内酰胺结构。据此本发明利用罗丹明的特殊结构，制备了一种新的双罗丹明类化学发光试剂(罗丹明6G酰肼草酰胺)并对其化学发光性能做了系统考察，且以此建立了一种测定亚硝酸根的新的分析方法。

罗丹明6G酰肼草酰胺的分子结构式如附图1所示。

发明内容

罗丹明6G酰肼草酰胺的合成工艺如下：

本发明先用罗丹明6G合成罗丹明6G酰肼，再由罗丹明6G酰肼(R6GH)和草酰氯反应制备罗丹明6G酰肼草酰胺(R6GHO)。

在制备罗丹明6G酰肼时将罗丹明6G溶于热无水乙醇中，直至其完全溶解，并在降温后边搅拌边加入80％水合联氨，水浴加热，回流2～3h。反应完成后，加入冷冻水使其析出土黄色固体，抽滤，用少量冷冻水洗涤，干燥，得到土黄色粉末。

制备罗丹明6G酰肼草酰胺(R6GHO)时，先将草酰氯用二氯甲烷稀释10倍后，再加入罗丹明6G酰肼溶液中。所有的试剂和玻璃仪器使用前应该要先干燥，加入试剂后，将搅拌的混合物放置在冷水浴中约2～3小时，然后减压除去溶剂。再用0.5mol/LHCl溶液使烧瓶中的固体全部溶解为澄清的紫红色溶液。之后，再缓慢加入0.5mol/LNaOH溶液，边加边搅拌直到溶液的pH达到8～9，经过滤，洗涤，干燥后得到紫红色固体。

罗丹明6G酰肼草酰胺(R6GHO)标准液的配制(1.00mmol/L)：用电子分析天平准确称量0.2276g罗丹明6G酰肼草酰胺(R6GHO)，放入干燥的小烧杯中，加入2ml2mol/L盐酸(HCl)，边加边搅拌，直至罗丹明6G酰肼草酰胺(R6GHO)恰好完全溶解，后加入适量水稀释，将小烧杯内的溶液转移至250ml容量瓶中，用纯净水定容至刻度并摇匀备用。

亚硝酸钠溶液(NO^2-)的配制：准确称取0.0690g亚硝酸钠，溶解到100ml容量瓶中定容摇匀放置于暗处(可放1月)，其浓度为10.0mmol/L。用移液管准确移取10.00ml 10.0mmol/L亚硝酸钠溶液于100ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀放于暗处(可存放1星期)，此浓度为1.0mmol/L。取0.5ml1.0mmol/L亚硝酸钠溶液于100ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀放于暗处(现配现用)，浓度为0.005mmol/L。

双氧水溶液：取25ml 30％双氧水溶液于250ml容量瓶中，用纯净水定容，得3％的双氧水溶液备用。

本发明经实验探究发现RBHO-H₂O₂-H⁺-NO^2-体系也存在微弱的化学发光现象，但R6GHO-H₂O₂-H⁺-NO^2-体系的化学发光性能远比RBHO-H₂O₂-H⁺-NO^2-化学发光体系优异。