[发明专利]牛CYP4A11基因在促进人皮下前脂肪细胞系HPA‑s分化中的应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种牛CYP4A11基因在促进人皮下前脂肪细胞系HPA-s分化中的应用。

背景技术

人CYP4A11基因是细胞色素p450家族成员之一，现已知人CYP4A11基因的主要功能是催化花生四希酸生成20-羟二十烷四烯酸，而20-羟二十烷四烯酸具有调节血压的作用。另外，CYP4A11基因还参与脂肪酸的ω-氧化，说明它与脂肪酸代谢有关。我们之前的研究发现，CYP4A11基因在中国黄牛上存在多拷贝(即插入型拷贝数变异)，并且，CYP4A11基因位于与牛肉质性状相关的QTL内。据此我们推测，牛CYP4A11基因可能会对肉质产生影响，而评价牛肉品质的一个很重要的指标就是脂肪含量，但CYP4A11基因是否会对脂肪的形成和沉积存在影响目前尚属未知。

在由前体脂肪细胞向成熟脂肪细胞分化的过程中，与脂肪分化相关的一系列基因被启动并表达，同时脂滴形成，因此，往往以这些基因的表达和细胞内脂质含量的增加作为判断脂肪细胞分化的标准。综上所述，研究牛CYP4A11基因的表达以及其表达产物蛋白的生理功能具有重要的生物学意义。然而现有技术在这方面的研究尚处于起步阶段，并未公开牛CYP4A11基因的生物学功能。

发明内容

本发明提供的一种牛CYP4A11基因在促进人皮下前脂肪细胞系HPA-s分化中的应用，发现牛CYP4A11基因与脂肪细胞的分化相关，尤其在HPA-s细胞分化成成熟脂肪细胞的过程中具有重要作用，为CYP4A11基因的生物学功能研究奠定了基础。

本发明的第一个目的是提供一种牛CYP4A11基因在促进人皮下前脂肪细胞系HPA-s分化中的应用，所述应用具体是指如SEQ ID NO.1所示的牛CYP4A11基因在促进人皮下前脂肪细胞系HPA-s分化中的应用。

优选的，上述应用中，所述应用具体指由SEQ ID NO.1所示的牛CYP4A11基因所表达的蛋白质在促进人皮下前脂肪细胞系HPA-s分化中的应用。

优选的，上述应用中，所述促进人皮下前脂肪细胞系HPA-s分化包括促进人皮下前脂肪细胞系HPA-s分化为成熟的脂肪细胞和促进细胞中脂滴的形成。

优选的，上述应用中，牛CYP4A11基因按照以下步骤表达蛋白质：

S1，将SEQ ID NO.1所示的牛CYP4A11基因的核苷酸序列连入pcDNA3.1(+)空载体中，得到pcDNA 3.1(+)-CYP4A11真核表达载体；

S2，将pcDNA 3.1(+)-CYP4A11真核表达载体转化至细胞表达系统中进行表达，最后收集牛CYP4A11基因表达的蛋白质产物。

优选的，上述应用中，所述细胞表达系统为3T3-L1细胞系或者HPA-s细胞系。

与现有技术相比，本发明提供的一种牛CYP4A11基因在促进人皮下前脂肪细胞系HPA-s分化中的应用，具有以下有益效果：

为了探究牛CYP4A11基因对前体脂肪细胞的促分化作用，同时也作为对牛CYP4A11基因功能的基础研究，我们选取了2个细胞系，进行该基因的功能研究，以期为后续研究提供资料参考。

在本发明中，我们通过在HPA-s细胞系中过表达牛CYP4A11基因，并测定脂肪细胞内的脂质含量和甘油-3-磷酸脱氢酶(G3PDH)活性，来检测由牛CYP4A11基因所引起的HPA-s细胞向成熟脂肪细胞分化的程度。我们发现，过表达牛CYP4A11基因后，用油红O进行细胞染色，在对照组和试验组都检测到了脂滴聚集，说明人皮下前脂肪细胞HPA-s经过诱导分化已经分化出了成熟的脂肪细胞，并且试验组细胞的分化程度极显著高于对照组，这进一步说明过表达牛CYP4A11基因后，能显著促进人皮下前脂肪细胞系HPA-s的分化和脂滴的形成，为CYP4A11基因的生物学功能研究和应用奠定了基础。

附图说明

图1是pcDNA 3.1(+)空载体图谱；

图2是pcDNA 3.1(+)空载体的MCS序列；

图3是牛CYP4A11基因的PCR电泳图片；

其中M泳道表示Marker D2000，1号泳道表示牛CYP4A11基因的PCR产物；

图4是pcDNA3.1(+)-CYP4A11真核表达载体的双酶切检测结果；