[发明专利]分泌型抗免疫检查点抗体、胞内免疫检查点抑制分子及tEGFR分子的共表达及其应用

说明书

本发明提出了一种表达载体、慢病毒、转基因细胞、分泌型抗体以及用于治疗癌症的治疗组合物。该表达载体携带下列核酸分子：(a)第一核酸分子，所述第一核酸分子编码分泌型免疫检查点抑制分子片段；(b)第二核酸分子，所述第二核酸分子用于沉默细胞內免疫检查点，任选地，进一步携带第三核酸分子，所述第三核酸分子编码无功能EGFR。将本发明实施例的表达载体导入受体细胞中，分泌型抗免疫检查点抗体在受体细胞中高效表达并分泌到细胞外，同时受体细胞的免疫检查点分子被特异性沉默，由免疫检查点介导的免疫逃逸机制被阻遏。将本发明实施例的表达载体导入受体细胞，如淋巴细胞中，淋巴细胞的增殖能力及效应功能增强，对肿瘤细胞的特异性杀伤更强大更有效。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及共表达分泌型抗免疫检查点抗体、胞 内免疫检查点抑制分子及tEGFR表面标记的细胞及其应用，更具体地，本发明涉及表达载 体、慢病毒、转基因细胞、分泌型抗体以及用于治疗癌症的治疗组合物。

背景技术

癌症，由于细胞内基因突变导致细胞增殖失控的一种疾病。目前已成为人类健康的重 大威胁，是导致人类死亡的主要原因之一。世界卫生组织(WHO)在发表的《全球癌症报告2014》中指出，2012年全球癌症患者和死亡病例都在迅速增加。因此，寻找高效特异的 癌症治疗方法具有重大的临床价值。

传统的肿瘤治疗方法主要包括手术、放疗和化疗，但这几种方法都具有较大的局限性， 比如由于癌细胞的近端入侵或远端转移，手术切除后的肿瘤转移复发率较高，而放疗和化 疗对于机体自身的正常细胞尤其是造血系统和免疫系统会造成严重的损害，因此对于已发 生肿瘤转移的患者也很难达到较好的远期疗效。随着肿瘤分子机制的深入研究和生物技术 的进一步发展，靶向药物治疗和免疫治疗在肿瘤的综合治疗中发挥着愈来愈大的作用。靶 向疗法主要包括单克隆抗体和小分子靶向药物，而免疫疗法主要包括细胞因子疗法、免疫 检查点单抗、过继免疫疗法，肿瘤疫苗等，通过调动机体的抗肿瘤免疫反应，从而控制和 杀伤肿瘤细胞，因此有效率高，特异性强，耐受性好的优点，在肿瘤治疗中具有广阔的前 景。

然而，肿瘤的免疫疗法只对部分病人有效，仍有待进一步深入研究和开发，来增强临 床疗效。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。

在本发明的第一方面，本发明提出了一种表达载体。根据本发明的实施例，所述表达 载体携带下列核酸分子：(a)第一核酸分子，所述第一核酸分子编码分泌型免疫检查点抑 制分子片段；(b)第二核酸分子，所述第二核酸分子用于沉默细胞內免疫检查点，任选地， 进一步携带第三核酸分子，所述第三核酸分子编码无功能EGFR表面标记。将本发明实施 例的表达载体导入受体细胞中，分泌型抗免疫检查点抗体在受体细胞中高效表达并分泌到 细胞外，同时受体细胞的免疫检查点分子被特异性沉默，由免疫检查点介导的免疫逃逸机 制被阻遏。将本发明实施例的表达载体导入受体细胞，如淋巴细胞中，导致淋巴细胞的增 殖能力增强，对肿瘤细胞的特异性杀伤更强大更有效。

根据本发明的实施例，上述表达载体还可以进一步包括如下一种或多种附加技术特征：

根据本发明的实施例，所述分泌型免疫检查点抑制分子片段包括：抗免疫检查点单链 抗体分子以及IgG Fc，任选地，所述IgG Fc为IgG1Fc或IgG4Fc。由此，分泌型免疫检查点抑制分子片段分泌到细胞外，并且与细胞表面的免疫检查点特异性结合，进而有效阻遏免疫检查点介导的免疫逃逸机制。

根据本发明的实施例，所述免疫检查点分子包括选自CTLA4、PD-1、PD-L1，PD-L2，TIM3、BTLA、LAG-3、IRAK-M、SOCS1、A20、CBL-B的至少之一。将本发明实施例 的表达载体导入受体淋巴细胞，一方面，分泌型免疫检查点抑制分子片段分泌出后与上述 免疫检查点分子结合，进而竞争性抑制肿瘤细胞的免疫逃逸，另一方面，受体淋巴细胞的 免疫检查点被沉默，淋巴细胞介导的免疫逃逸机制又被抑制，进而淋巴细胞对肿瘤细胞的 特异性杀伤进一步显著增强。