[发明专利]一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法

说明书

本发明涉及沼液浓缩液成分分离制备领域，具体地说，是一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法。具体包括步骤：用甲醇浸提沼液浓缩液干燥后的固体物质，得到浸提液；用乙酸乙酯萃取浸提液的烘干物，得到滤渣；用正丁醇萃取滤渣若干次后，得到正丁醇萃取液；将萃取液上样过硅胶柱，用二氯甲烷：乙酸乙酯为洗脱剂，按体积比10:1；8:1；6:1；4:1；2:1进行梯度洗脱，设定等体积为一个馏分收集，检测并合并相同斑点的馏分后，分离纯化得到玉米素。本发明的纯化方法操作简单，从而使得操作成本低，因此具有可观的经济实用价值和广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及沼液浓缩液成分分离制备领域，具体地说，是一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法。

背景技术

目前，关于沼液和沼渣的有机质成分报道很少，且从沼液中分离得到的化合物，主要是植物激素、游离氨基酸、Vitamin B、抗生素、2-喹啉酮及17β-雌二醇，他们表现出促进作物生长发育，抗微生物等活性。目前对沼液已有的研究主要是直接将沼液做简单的处理(如玻璃纤维等)后直接做高效液相测量，但沼液中成分特别复杂，直接做高效液相会有许多杂峰的影响，会降低沼液成分研究的精确性。运用本方法对沼液进行处理，去除了沼液中大量水分，挥发性胺类和固体杂质，将沼液中有效活性成分提取出来。后面运用的玉米素洗脱方法将玉米素最大程度洗脱出来，对沼液中玉米素的含量有更精确认识。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明的内容在于提供一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法，包括以下步骤：

一种沼液浓缩液中玉米素的提取制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用甲醇浸提沼液浓缩液干燥后的固体物质，得到浸提液；

其中，所述步骤(1)的沼液干燥的方法为烘干。

其中，所述步骤(1)的甲醇浸提沼液浓缩液干燥后的固体物质的方法中，提取时间为1～2h，提取2次,料液质量/体积比为0.8-1.5g/mL。

其中，所述步骤(1)的甲醇浸提沼液浓缩液干燥后的固体物质的方法中，提取时间为1～2h，提取2次,料液质量/体积比为0.8-1.5g/mL。

具体可以为，取沼液200g，烘箱烘干称重。称取适量干燥物，置于圆底烧瓶中,加入200ml甲醇，加热回流2h，2次，得到浸提液。

(2)用乙酸乙酯萃取步骤(1)中的浸提液的烘干物，得到滤渣；

优选的，所述步骤(2)的萃取的次数为3次。

具体可以为，将浸提液浓缩烘干后，用适量的乙酸乙酯萃取3次，得到滤渣。

(3)用正丁醇萃取步骤(2)的滤渣若干次后，将若干次的正丁醇萃取液混合得到萃取液；

优选的，所述步骤(3)的若干次为3次。

(4)将步骤(3)的萃取液上样过硅胶柱，用二氯甲烷：乙酸乙酯为洗脱剂，按体积比10:1；8:1；6:1；4:1；2:1进行梯度洗脱，设定等体积为一个馏分收集(可以为每20mL为一个馏分收集)，检测并合并相同斑点的馏分后，分离纯化得到玉米素。尝试用石油醚-丙酮；石油醚-乙酸乙酯；氯仿-甲醇洗脱剂系统，收集馏分后点板发现几乎没有或者只有微弱荧光点，说明洗脱效果并不好。当尝试用二氯甲烷：乙酸乙酯为洗脱剂，按体积比20:1；10:1；5:1进行梯度洗脱时，意外的发现点板时荧光点比较明显且比较集中。而且该洗脱方法使洗脱液的极性逐渐增大，能将沼液中极性不同的成分充分洗脱下来，不会造成回收率的损失。