[发明专利]适用于MALDI-TOF MS检测的病原体样品前处理方法及其应用

权利要求书

1.一种具有生物安全性的、适用于MALDI-TOF MS检测的病原体样品前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）用试剂A悬浮待测病原体样品，所述试剂A为50～90％甲酸和80～100％乙腈的等体积混合液，用量为1mg菌加入100ul试剂A；

（2）混匀后用带滤芯的生物安全移液枪头移出悬浮液，接种环刮取约1mg菌落与管中试剂A液混匀，用加样器时 用带滤芯的生物安全移液头吸取样本，去掉滤芯部分后直接将1ul样本点于样品靶上，干燥后在样本点上覆盖1ul C的饱和液，即为MALDI-TOF MS检测上样前病原体的蛋白样本，干燥后进质谱检测；

所述生物安全移液枪头底端具有可脱离的滤芯，滤芯孔径为0.003～0.2μm；

所述1ul C的饱和液是用B液配制的，B液即基质溶解液，组成为：1～5％三氟乙酸和40～60％乙腈水溶液；

C液为基质α-氰基-4-羟基肉桂酸溶于B液做为溶解液配置而得。

2.一种试剂在适用于MALDI-TOF MS检测的、具有生物安全性的病原体样品前处理中的应用，所述试剂为50～90％甲酸和80～100％乙腈的等体积混合液；

所述病原体样品前处理方法包括以下步骤：

（1）用前述试剂悬浮待测病原体样品，所述试剂的用量为1mg菌加入100ul试剂A；

（2）混匀后用带滤芯的生物安全移液枪头移出悬浮液，接种环刮取约1mg菌落与管中试剂A液混匀，用加样器使用带滤芯的生物安全移液头吸取样本，去掉滤芯部分后直接将1ul样本点于样品靶上，干燥后在样本点上覆盖1ul C的饱和液，即为MALDI-TOF MS检测上样前病原体的蛋白样本，干燥后进质谱检测；所述生物安全移液枪头底端具有可脱离的滤芯，滤芯孔径为0.003～0.2μm；所述1ul C的饱和液是用B液配制的，B液即基质溶解液：1～5％三氟乙酸和40～60％乙腈水溶液；

C液为基质α-氰基-4-羟基肉桂酸溶于B液做为溶解液配置而得。

3.一种具有生物安全性的、适用于MALDI-TOF MS检测的病原体样品前处理试剂盒在非疾病诊断目的的病原体质谱检测中的应用，其特征在于，含有：50～90％甲酸和80～100％乙腈的等体积混合液；以及带滤芯、可脱离的生物安全移液枪头，可脱离的滤芯位于生物安全移液枪头底端，滤芯孔径为0.003～0.2μm；

所述应用包括以下步骤：

（1）用试剂A悬浮待测病原体样品，所述试剂A为前述含50～90％甲酸和80～100％乙腈的等体积混合液；

用量为1mg菌加入100ul试剂A；

（2）混匀后用带滤芯的生物安全移液枪头移出悬浮液，接种环刮取约1mg菌落与管中试剂A液混匀，用加样器使用带滤芯的生物安全移液头吸取样本，去掉滤芯部分后直接将1ul样本点于样品靶上，干燥后在样本点上覆盖1ul C的饱和液，即为MALDI-TOF MS检测上样前病原体的蛋白样本，干燥后进质谱检测；

所述1ul C的饱和液是用B液配制的，B液即基质溶解液：1～5％三氟乙酸和40～60％乙腈水溶液；

C液为基质α-氰基-4-羟基肉桂酸溶于B液做为溶解液配置而得。

4.一种具有生物安全性的病原体质谱检测试剂盒在非疾病诊断目的的病原体质谱检测中的应用，其特征在于，含有：

试剂A：50～90％甲酸和80～100％乙腈的等体积混合液；

基质溶解液：1～5％三氟乙酸和40～60％乙腈水溶液；

基质：α-氰基-4-羟基肉桂酸；

带滤芯、可脱离的生物安全移液枪头，可脱离的滤芯位于生物安全移液枪头底端，滤芯孔径为0.003～0.2μm；

所述应用包括以下步骤：

（1）用试剂A悬浮待测病原体样品；用量为1mg菌加入100ul试剂A；

（2）混匀后用带滤芯的生物安全移液枪头移出悬浮液，接种环刮取约1mg菌落与管中试剂A液混匀，用加样器使用前述带滤芯的生物安全移液头吸取样本，去掉滤芯部分后直接将1ul样本点于样品靶上，干燥后在样本点上覆盖1ul 基质的饱和溶解液，即为MALDI-TOF MS检测上样前病原体的蛋白样本，干燥后进质谱检测；

所述1ul 基质的饱和溶解液是将基质α-氰基-4-羟基肉桂酸用1～5％三氟乙酸和40～60％乙腈水溶液溶解配制而得。