[发明专利]微环DNA表达连接人和猴CD20与效应细胞抗原的桥接分子及其应用

说明书

本申请涉及微环DNA表达连接人和猴CD20与效应细胞抗原的桥接分子及其应用。具体涉及一种用于在体内表达人‑猴交叉反应性双特异性抗体(hmBsAb)的微环DNA载体。人‑猴双特异性抗体(hmBsAb)能够结合人或猴B细胞或B系癌细胞的CD20分子，也能够结合人或猴的T细胞或NK细胞，用于癌症及其它疾病的治疗。在申请新药临床试验时，人‑猴交叉反应性双特异性抗体有利于借助猴子模型评价双特异性抗体类药物的安全性与有效性，以促进药物的开发进程。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种微环(Minicircle,MC)DNA载体，更具体为一种用于在体内表达人-猴交叉反应性双特异性抗体(Human-Monkey cross-reactiveBispecific antibody，hmBsAb)的微环DNA载体。

背景技术

双特异性抗体(Bispecific antibody，简称BsAb)是基因工程抗体的一种，是一类具有双功能的抗体杂交分子，两价抗体中的可变结构域(或者Fab段)分别具有不同的特异性，能够与两种不同的配体结合。研究人员在设计BsAb分子时，考虑到BsAb能够与靶细胞上的抗原分子结合，又可以与效应细胞上的功能分子结合。这样，BsAb分子就在靶细胞(抗原分子)和效应细胞(功能分子)之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应。抗肿瘤和抗免疫活性细胞CD16或CD3的双特异性抗体，不仅具有激活T细胞或NK细胞的作用，而且可以通过抗肿瘤的Fab段特异性结合肿瘤细胞而发挥作用，提高局部T细胞或NK细胞的浓度，增强效应分子杀伤肿瘤的能力。BsAb现已成为抗体工程领域的研究热点，在肿瘤的免疫治疗中具有广阔的应用前景，是未来抗体药物市场的发展方向。

目前双特异性抗体BsAb的制备主要包括三种方法：化学偶联法、杂交-杂交瘤法、基因工程抗体制备法。其中基因工程的方法是目前最常用和最先进的工艺技术。微环DNA载体表达方法属于基因工程制备法。利用微环DNA载体可以表达微环双特异性抗体MC.BsAb，所表达的双特异性抗体可以连接靶细胞与T细胞或NK细胞，并触发T细胞或NK细胞杀灭靶细胞。与该发明最接近的相关技术是我们之前发明的微环DNA载体表达双特异性抗体的技术MC.BsAb(CN201710245146.6)。

在申请新药临床试验时，除了小动物模型的数据之外，必须要有大动物，如猴的试验数据。目前研发中的双特异性抗体大多是人特异性的，与猴的抗原无交叉反应，难以利用猴子评估其安全性与有效性。猴属于非人灵长类，其基因组与人类高度近似，是药物临床前安全性和有效性评价必备的重要模式动物。由此可见，开发一种人-猴交叉反应性双特异性抗体(Human-Monkey cross-reactive Bispecific antibody，hmBsAb)，有利于借助猴子模型评价双特异性抗体类药物的安全性与有效性，以促进药物的开发进程。

发明内容

本发明提供一种表达人-猴交叉反应性靶细胞-效应细胞桥接分子(Bridgebetween human-monkey cross-reactive target cells and effector cells，hmBTEC)的重组基因载体，所述桥接分子包含：与靶细胞作用靶点特异性结合的部分A，和与效应细胞作用靶点特异性结合的部分B。

在一个实施方案中，所述重组基因载体选自非病毒基因载体，如标准质粒或其它环状表达盒子。优选的，所述重组基因载体选自微环DNA载体。其中，所述桥接分子选自蛋白或多肽。优选的，所述桥接分子选自双特异性抗体。其中，所述猴选自食蟹猴。

在一个实施方案中，所述重组基因载体为重组表达载体，选自原核表达载体或真核表达载体；优选真核表达载体；更优选用于哺乳动物细胞真核表达的重组表达载体。

在一个实施方案中，所述部分A和所述部分B分别选自蛋白分子或多肽分子。优选的，所述部分A和部分B分别选自Fab、Fab’、单链抗体(scFv)、单域抗体(V_HH)、单链T细胞受体(scTCR)和其它。