[发明专利]一种合相色谱‑串联质谱法测定电子烟烟液中降烟碱对映异构体含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于理化分析技术领域，具体涉及一种合相色谱-串联质谱法测定电子烟烟液中降烟碱对映异构体含量的方法。

背景技术

电子烟，又名电子烟碱传送系统，它能够通过内置雾化器将烟弹中的烟液雾化并将雾化气输送至口腔和肺部，而雾化气中往往含有不同浓度水平的烟碱。出于成本考虑，电子烟烟液中添加的烟碱基本都是来源于烟草提取。除烟碱外，烟草中还含有其他次要生物碱，在烟草中含量较多、人们研究较多的生物碱主要有降烟碱、新烟草碱、假木贼碱、麦斯明等，这些次要生物碱也具有一定的生物活性，且是烟草及烟草制品中重要致癌物——烟草特有亚硝胺（TSNAs）的直接前体物质。其中，降烟碱是电子烟烟液中的主要生物碱之一，降烟碱分子含有一个手性中心，所以降烟碱有两个对映体：S-(-)-降烟碱（简称S-降烟碱）和R-(+)-降烟碱（简称R-降烟碱）。根据对映异构体的特性，降烟碱的两个对映对映体可能具有完全不同的代谢机理和生理特性。此外，测定电子烟烟液中降烟碱的对映异构体含量是判定电子烟烟液职工烟碱来源的重要手段，例如，合成烟碱中S-降烟碱和R-降烟碱比例一般为1:1，而提取烟碱中的降烟碱对映异构体含量应和烟草一致。因此，有必要对电子烟烟液中降烟碱的对映异构体含量进行分析测定。

目前，文献报道降烟碱对映异构体的测定方法主要有气相色谱-质谱联用法（GC-MS，Beiträge Zur Tabakforschung. 2013;25(7):649-659. Chirality. 1999;11(1):82-84.）、多维气相色谱-质谱联用法（MDGC-MS，J. Chromatogr. B. 2008;865(1):13-17.）、毛细管电泳法（CE，Electrophoresis. 2009;30(2):349–356.）等，但是，GC-MS和MDGC-MS需要在前处理过程中进行衍生化，费时费力，CE仅使用保留时间进行定性，定性能力相对较差，容易出现假阳性结果。此外，现有文献主要针对烟草基质，尚无判定电子烟烟液中降烟碱对映异构体含量的方法报道。因此，有必要开发一种灵敏度高、精密度好、适合大批量准确定量电子烟烟液中S-降烟碱和R-降烟碱的方法。

发明内容

本发明的目的正是基于上述技术不足，建立了一种合相色谱-串联质谱法测定电子烟烟液中降烟碱对映异构体含量的方法。本方法在前处理过程中不需要衍生化过程，实现了S-降烟碱和R-降烟碱的基线分离，并使用二级质谱进行定性和定量，避免出现假阳性结果，所以，本方法具有操作简便、灵敏度高、准确定好等优点。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

将电子烟烟液样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用二氯甲烷萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用串联手性柱-合相色谱-串联质谱法分析，采用峰面积归一化法定量检测电子烟烟液中S-降烟碱和R-降烟碱的比例。

具体步骤如下：

1. 标准溶液的配制

称取约100.0 mg的S-降烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度约为2.0 mg/mL的S-降烟碱标准储备液；称取约100.0 mg的R-降烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度约为2.0 mg/mL的R-降烟碱标准储备液；利用S-降烟碱标准储备液和R-降烟碱标准储备液稀释配制S-降烟碱和R-降烟碱浓度分别为100 μg/mL和100 μg/mL的混合标准溶液。

2. 电子烟烟液样品的萃取

选择正己烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷五种溶剂进行萃取效率的比较。结果发现，二氯甲烷对降烟碱的萃取效率最高，甲基叔丁基醚、乙酸乙酯和三氯甲烷次之，正己烷的萃取效率最差，故选择二氯甲烷为最终的萃取溶剂。

优化的萃取步骤为：

称取0.3 g样品于15 mL具塞离心管中，加入2.0 mL 5%的氢氧化钠溶液（质量比），涡旋1 min混匀后静置10 min浸润样品，取10 mL二氯甲烷到离心管中，并于旋涡混合器上以4000 rpm速度振荡30 min。

4. 萃取液的净化

取1.5 mL上清液于2 mL净化离心管中（内含150 mg无水硫酸镁，50mg PSA吸附剂，25 mg GCB吸附剂，统称基质分散固相萃取材料），于旋涡混合器上以4000 rpm振荡2 min，以10000 rpm离心1 min。取上清液过0.45 μm有机相滤膜后进液相分析。

5. 串联手性柱-合相色谱-串联质谱法条件