[发明专利]一种抗丁丙诺啡杂交瘤细胞株、抗体的制备方法及其应用

说明书

本发明提供了一种抗丁丙诺啡杂交瘤细胞株BUP 9X1，该细胞株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO.C201728；本发明还提供了制备抗丁丙诺啡杂交瘤细胞株BUP 9X1的方法。本发明又提供了一种抗丁丙诺啡单克隆抗体。本发明杂交瘤细胞株BUP 9X1可分泌的抗丁丙诺啡单克隆抗体具有高灵敏度特点，适用于10ng/ml阈值的检测。本发明杂交瘤细胞株BUP 9X1可分泌的抗丁丙诺啡单克隆抗体具有高灵敏度特点，适用于10ng/ml阈值的检测。本发明在制备丁丙诺啡人工抗原过程中，所选的位点和交联方法都没有明显改变其结构，保留了抗原决定簇，获得的丁丙诺啡人工抗原保持了丁丙诺啡的结构特异性，有利于相应丁丙诺啡抗体的产生。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及杂交瘤细胞株、细胞株分泌的抗体以及制备方法。

具体涉及抗丁丙诺啡杂交瘤细胞株，该细胞株分泌的抗丁丙诺啡单克隆抗体，以及制备该抗丁丙诺啡杂交瘤细胞株的方法、分泌抗丁丙诺啡单克隆抗体的方法。

背景技术

丁丙诺啡(buprenorphine，BUP)，是蒂巴因的衍生物，药物制剂为盐酸丁内诺啡，商品名：沙菲片、盐酸丁丙诺啡舌下片、布诺啡、舒美奋、M6029等，分子式：C₂₉H₄₁NO₄。丁丙诺啡是O3-去甲蒂巴因类的衍生物，是阿片受体激动-拮抗剂, 化学名称为N-环丙基甲基-7a[I-(S)-1-羟基-1，2，3三甲基]-6，14-桥乙烷-6，7，8，14-四氢东罂栗碱，其化学结构与吗啡相似，由于在第6和7位碳原子分别有甲氧基和异已醇基，这两个基团有增强阿片受体的激动作用，因此丁丙诺啡有激动-拮抗的双重特性。

特别的，丁丙诺啡(buprenorphine，BUP)是国家严控的一类精神药品(中国食品药品监督管理局，国食药监安2005年481号)，属于阿片类部分激动剂，由于其成瘾性低，部分国家用来治疗阿片类成瘾患者。但是，丁丙诺啡的滥用可以导致呼吸抑制。

丁丙诺啡是半合成阿片生物碱蒂巴因(thebaine)衍生物。自20世纪60年代发现后，其实验室研究和临床应用研究逐步扩大和深入。丁丙诺啡在发现初期被归属于阿片受体部分激动剂。由于在某些动物疼痛模型实验中显示的呈钟形量效曲线的镇痛作用模式误推导到人，使其在有些国家不被作为治疗重度疼痛的主要品种，导致其使用范围受到限制，尤其在20世纪90年代初期的癌症疼痛治疗中受到冷遇。但在欧洲和大洋洲，临床应用丁丙诺啡有增无减。临床实践积累的资料显示，尽管丁丙诺啡属于阿片受体部分激动剂，但能有效治疗重度疼痛，其镇痛作用强度比吗啡高25~30倍(肌肉注射给药)，并且呼吸抑制、便秘等副作用较小，药物依赖性较低。经研究证实，丁丙诺啡作为阿片类药物，药理性质不是简单类似于吗啡，而有着不同于其他u阿片受体激动剂的药理特性，与吗啡、芬太尼等比较，丁丙诺啡引起呼吸抑制，戒断反应的危险性较小，不产生如吗啡、芬太尼等药物引起的痛敏反应，预示其颇具临床应用价值。近年来，丁丙诺啡不仅有注射剂用于急性镇痛，还开发了舌下片、透皮贴剂等多种剂型，用于慢性疼痛、癌性疼痛、神经源性疼痛的止痛治疗；并且可替代美沙酮治疗阿片类物质成瘾患者，已成为临床治疗疼痛和药物依赖备受关注的药物。

测定生物检材中BUP及其类似物主要基于GC，GC—MS，HPLC，LC／MS等仪器检测，这些色谱法具有较强的灵敏度和选择性，但操作繁琐、试剂昂贵，不适合现场即时检测。以抗原-抗体特异性结合反应为基础的免疫检测法(Immunoassay)，既摒弃了色谱法的缺点，又具有检测灵敏、特异、简便、准确的优点，已广泛应用于小分子物质的检测。要建立丁丙诺啡的免疫检测方法，必须获得抗丁丙诺啡杂交瘤细胞株，使其分泌产生抗丁丙诺啡单克隆抗体。

丁丙诺啡胶体金试纸条产品具有快速，操作简单、灵敏、可靠、价格便宜等优点，适用于案发现场即时定性筛选检测。目前受核心原料丁丙诺啡单抗的灵敏度所限，现有商业化产品的检测阈值50ng/ml左右，已经不能满足检测阈值 10ng/ml的要求，所以亟待开发出高灵敏度的丁丙诺啡抗体，以适应检测需要。

发明内容