[发明专利]一种鸡毒支原体疫苗效力测定方法

说明书

本发明公开了一种鸡毒支原体疫苗效力测定方法，属于生物技术领域，本发明方法包括以下步骤：（1）免疫动物；（2）血清采集、稀释；（3）支原体‑血清结合、培养；（4）结果判定。本发明使用血清学方法替代动物试验，操作简单，技术要求低，重复性强，特异性好，该方法的建立避免了免疫攻毒保护法结果判定的主观性，避免散毒，适用于普遍推广。

技术领域

本发明涉及一种疫苗效力的测定方法，尤其是一种鸡毒支原体疫苗效力测定方法，属于生物技术领域。

背景技术

鸡毒支原体病是由鸡毒支原体（MG）感染引起的鸡、火鸡慢性呼吸道病（CRD），临床上主要表现为咳嗽、流鼻涕，呼吸时有啰音，严重时张口呼吸等症状，感染鸡剖检经常可见气囊炎和窦炎症状。据有关报道，MG感染鸡群后，雏鸡、蛋鸡、肉鸡的生产性能均会受到不同程度的影响，且其造成的免疫抑制极易引起其他疾病的继发或伴发感染，成为危害养鸡业的重要疾病之一。有效的疫苗免疫是预防鸡毒支原体感染的重要手段。

目前鸡毒支原体疫苗效力测定方法主要是免疫攻毒保护法，根据攻毒后鸡气囊病变积分情况进行结果判定。上述试验的实施需要有负压的工作环境，每次都需要剖杀试验鸡，且评价结果时受主观因素的影响较大，以致经常会造成检验结果的误差；同时强毒攻击也存在生物安全隐患，易散毒；在实际工作中还受个体、环境、饲养等因素的影响，重复性差，为疫苗效力的研究带来诸多的困难。本发明方法可替代免疫攻毒保护法，结果客观、重复性强、操作简单，更适于实际临床应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术之缺陷、提供一种新型的鸡毒支原体疫苗效力测定方法，以提高检测精确度，缩短检测周期。

本发明所述技术问题是由以下技术方案解决的。

一种鸡毒支原体疫苗效力测定方法，它包括以下步骤：

（1）免疫动物

选用SPF鸡作为实验动物，用所述鸡毒支原体疫苗对实验动物进行免疫。

（2）血清采集、稀释

免疫程序结束后，无菌采集动物血清，灭活，对血清做倍比稀释，得到不同稀释度的血清，作为待检样品。

（3）支原体-血清结合、培养

取待检样品与鸡毒支原体检测用抗原等体积混合，每个样品设置复孔，同时设阴、阳性对照，将培养板密闭，恒温培养，定期观察。

（4）结果判定

试验成立条件：阳性对照孔均变为黄色，阴性对照孔均不变色。

判定时间：当阳性对照孔全部变为黄色时进行结果判定。

判定标准：将不变色孔的待检样品最高稀释倍数判定为所述待检样品的效价。

优选地，步骤（2）中所述血清采集时间优选免疫程序结束后28～35d，例如28d、30d、32d和34d等。

优选地，步骤（2）中所述待检血清做2~10倍系列倍比稀释，优选2～5倍系列稀释。

优选地，步骤（3）中所述鸡毒支原体检测用抗原为鸡毒支原体培养物用液体培养基稀释所得，其活菌滴度优选10~10000CCU/ml，更优选100~5000CCU/ml，进一步优选500~1000CCU/ml。

优选地，步骤（3）中所述阴性对照孔仅含液体培养基，但不添加鸡毒支原体和待检血清。

优选地，步骤（3）中所述阳性对照孔仅含鸡毒支原体检测用抗原，但不添加待检血清。