[发明专利]一种海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法

说明书

技术领域

本发明涉及海南三七，具体涉及一种海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，属于植物组织培养快速繁殖技术领域。

背景技术

姜科(Zingiberaceae)植物的繁殖方法可通过种子有性繁殖和切分根茎营养繁殖(高江云等，2006)。然而，有些种类是自交不亲和的，有些是多倍体，均不能结种子，只能通过根茎繁殖(高江云等，2006)。切分根茎分株时，不要分得太小，一般不要少于3‐4个，太少会导致生长缓慢或死亡，同时需要带有新生的块茎，新分开的块茎去掉所有茎、叶，以减少水分的丧失(高江云等，2006)。有的属的植物可以通过茎杆扦插来繁殖，如闭鞘姜属、舞花姜属、姜花属、姜属的部分种类，将成熟的茎杆切成带3‐4个节的茎段，直立插入沙土中2节，或茎段平放，用沙土稍微覆盖，保持湿润和遮荫，一段时间后，其节上的芽就会萌蘖形成小植株，稍大后分离栽培(高江云等，2006)。

海南三七(Kaempferia rotunda)属于姜科山奈属(Kaempferia)植物，分布于广东、广西、云南、台湾及亚洲南部至东南部(吴德邻等，1981)。其叶丛生，叶片长椭圆形，叶面淡绿色，具暗绿色斑纹，不耐霜冻，冬季地上部分枯死；花先于叶直接从根茎抽出，头状花序具4‐6朵花，花白色，唇瓣较大，紫红色；花期3‐4月；根茎药用有消肿止痛的功效；观叶类，株形好，叶漂亮，花晶莹美丽，在夏秋季节可作为观赏价值高的室内观叶植物(吴德邻等，1981；高江云等，2006；路国辉和王英强，2011；吴德邻等，2016)。由于海南三七不结果，所以不能进行有性繁殖。其也没有茎杆，因此，只能采用上述的切分根茎营养繁殖。因为母本量不足，切分根茎分株繁殖速度有限，而且对母株的损伤也很大，短期内得不到大量植株。

现有技术中，采用外植体诱导愈伤组织再分化成苗进行繁殖是可行的方法，但出苗率低，而且周期长。刘盼盼(华南师范大学硕士毕业论文，2013)将海南三七外植体分为假茎段(叶至块根之间的假茎)、叶片、根状茎、芽和茎尖(盆栽和组培苗)，结果盆栽的块茎、假茎段和叶片通过诱导愈伤组织再分化获得无菌苗的途径均失败；组培苗的假茎段和叶片诱导愈伤分化来获得无菌苗，由于愈伤组织增殖及诱导时间较久，并且愈伤至苗的诱导率不足10％，很难快速达到所需的无菌苗株数，故不采用此方法；组培苗的幼芽或茎尖，接种到MS+6‐BA 3.0mg/L+2,4‐D 1.0mg/L的培养基中，20d左右有愈伤组织产生，30d左右有绒毛状根生成，但也发现，接种到两种培养基MS+6‐BA 2.0/3.0mg/L+NAA 0.10mg/L上诱导，均只有10％诱导成苗，此种方法愈伤组织分化成苗率低。吴丹(华南师范大学硕士毕业论文，2014)将海南三七无菌苗的三个不同部位(叶片、假茎段和假茎段基部)接种在含有不同浓度的6‐BA和2，4‐D组合的愈伤诱导培养基上，置于黑暗条件下培养，40d后统计愈伤组织诱导情况，发现只有假茎段基部成功诱导出愈伤组织，最佳生长调节剂组合为6‐BA2.0mg/L+2,4‐D 1.0mg/L，再接种到愈伤组织分化第一阶段转绿需时30d，再将转绿的愈伤组织块转接入芽分化培养基中，40d左右可逐渐有苗长成，分化率大多集中在42％‐67％之间，此种方法愈伤分化出苗率仍然低，而且从外植体诱导愈伤到分化成苗就需时110d，周期长。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，本发明采用根茎芽基部作为外植体，提供了一种海南三七根茎芽基部诱导再生植物的方法，建立了高效的海南三七植株再生体系，显著提高海南三七的组培繁殖效率。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种海南三七根茎芽基部诱导再生植株的方法，其特征在于包括以下步骤：

(a)外植体前处理：采集海南三七的根茎用自来水清洗干净，剪掉根茎上的贮藏根和须根后，消毒后晾干；再放入洗净消毒的河沙中，恒温发芽，洗净根茎芽，取其芽基部为外植体材料；

(b)丛生芽诱导：将消毒好的外植体接种到诱导培养基上培养，直至外植体基部形成丛生芽；所述的诱导培养基成分为MS、6‐苄氨基腺嘌呤1.0～3.0mg/L、萘乙酸0.01～0.10mg/L、椰汁10.0～15.0％、蔗糖20～30g/L、卡拉胶粉9.5～10.0g/L；