[发明专利]一种功能菌株芽孢杆菌及其菌剂制备和应用方法

说明书

技术领域

本发明属于环保领域，具体地说涉及一种功能菌株芽孢杆菌及其菌剂制备和应用方法。

背景技术

2016年海南省环保厅公布，海南省耕地总面积为72.98万公顷，其中水田占51.5％；旱地(含水浇地、菜地)占48.5％。农作物总播种面积为84.82万公顷，平均复种指数为仅为1.16。粮食作物面积为42.18万公顷，占播种总面积的将近一半，总产量190.90万吨，4.53吨/公顷，折合301.7公斤/亩；瓜菜种植面积27.18万公顷，总产量621.71万吨，折合1525kg/亩；油料作物4.04万公顷，总产量10.92万吨，仅产180kg/亩；甘蔗0.43万公顷，总产量440.77万吨，也只有68吨/亩。这些说明了海南省的土壤生产能力较低。根据土壤普查的结果，海南全省以红壤为主，土壤酸性较强。加之海南降水量大，经过土壤淋滤作用，土壤的酸化十分严重。全省年平均降水量1403.5毫米，折合降水总量479.35亿立方米，全省地表水资源量195.94亿立方米，绝大部分降水通过地表流走。全省总用水量46.08亿立方米，其中农业用水占74.47％。地表水流走的同时带走土壤中的可溶性成分，导致土壤酸度进一步恶化。这种酸化已经给农林牧业带来和很大的负面影响，造成上述生产效率低下的现实。因此，采用何种措施，如何制止土壤进一步酸化，对于海南以及我国南方的农业生产将至关重要。

发明内容

本发明的目的是针对酸性土壤的改良，提供一株具有土壤改良新功能的菌株(Baillus sp.)J22(22号宝石)。本发明的另一目的是提供一种功能菌株芽孢杆菌及其菌剂制备和应用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种功能菌株芽孢杆菌，已于2011年08月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.5140。

利用上述来自于土壤的芽孢杆菌J22生产的具有土壤改良功能的微生物菌剂，其活性成分为土壤芽孢杆菌J22菌体。

上述微生物菌剂可以为液态制剂。

上述的微生物菌剂的制备方法，具体包括如下步骤：

(1)菌种活化：将-20℃保存的WJ22菌种接种LB平板培养基上，并在28～32℃下培养20～36小时，得活化的功能菌株；

(2)种子液的制备：挑取单菌落向MM液体培养基接入活化的功能菌株J22，在22～36℃下震荡培养36～72小时，得种子液；

(3)发酵培养：将步骤(2)所得种子液按体积百分比为1～10％比例接入发酵培养培养基MM中，再在22～36℃、摇床转速100～400rpm的条件下培养36～72小时，即得功能菌株J22的液体制剂；

其中所述的发酵培养基MM的组成成分为：K2HPO40.4～0.8％，KH2PO4 0.1～0.3％，NaCl 0.1～0.4％，MgSO4·7H2O 0.02～0.04％，CaCl2·2H2O 0.015～0.025％，(NH4)2SO40.1～0.3％，蔗糖2％～4％，大豆粉1～3％，其余为水。

上述制备方法中步骤(1)或(2)所述的LB平板培养基或LB斜面培养基的组成成分及其制备方法都是本领域技术人员熟知的，可按照通常的方法制备。

上述制备方法中所述的发酵培养基的制备方法，按照重量百分比称取K2HPO4、KH2PO4、NaCl、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O、(NH4)2SO4、蔗糖、大豆粉，然后将它们混合，再加水至所需体积即可。使用水合物时按含水量折算纯量后取用。

上述微生物菌剂，其芽孢杆菌J22的活菌数大于1×109cfu/g。

本发明涉及的芽孢杆菌(Bacillus sp.)J22是从正常农田土壤样品中筛选得到的。取土壤样品5g，用灭菌生理盐水稀释成浓度为10-1悬液，震荡成大致均匀悬浊液后，连续作10倍比稀释，吸取不同稀释度悬液500μL，分别涂布在LB培养基上，28-32℃培养(需氧或厌氧)3d，每天观察。适时挑取不同性状菌落，用常规方法进行单菌落分离，如此重复单菌落分离3次，获得纯化后的菌株。将菌株染色镜检后，再进一步进行纯培养。