[发明专利]禾本科植物幼苗中内生真菌的分离方法

说明书

本发明公开了一种禾本科植物幼苗中内生真菌的分离方法，将禾本科植物幼苗从茎秆基部截断，整体带回操作室；将幼苗放入0.5％次氯酸钠溶液中清洗20至25秒，使用清水清洗3至4次后放在无菌纸上干燥待用；将幼苗放入预先高温高压灭菌的捣碎器中进行捣碎；将幼苗浆液通过移液枪注射到玻璃培养瓶中；将培养瓶进行密封并放入摇床中28摄氏度培养6至10天；将培养瓶中的内生真菌菌落挑出放置到玻璃皿的培养基上进行单独培养，获得内生真菌菌株。相比现有技术，本发明具有真菌分离率高、杂菌含量少、操作简单、使用方便的特点。

技术领域

本发明涉及真菌分离领域，尤其涉及一种禾本科植物幼苗中内生真菌的分离方法。

背景技术

禾本科(学名：Gramineae)别称早熟禾科，分为620多属，10000多种，中国有190余属约1200种。地球陆地大约有20％覆盖着草，禾本科包括多种俗称作某某草的植物。但是必须指出，不是所有的草都是禾本科植物；同样，并不是所有禾本科植物都是低矮的草，就如竹子，也可以高达十数米，连片成林。禾本科包含了许多重要的粮食作物。

研究发现，内生真菌可以侵染多个禾本科植物品种，对其产生伤害。在禾本科植物幼苗时期进行内生真菌的检测和分离，显得尤为重要。

发明内容

发明目的：针对现有技术的不足与缺陷，本发明提供一种真菌分离率高、杂菌含量少、操作简单、使用方便的禾本科植物幼苗中内生真菌的分离方法。

技术方案：本发明所述的禾本科植物幼苗中内生真菌的分离方法，其特征在于：包括下述步骤，

(1)将禾本科植物幼苗从茎秆基部截断，整体带回操作室；

(2)将幼苗放入0.5％次氯酸钠溶液中清洗20至25秒，使用清水清洗3至4次后放在无菌纸上干燥待用；

(3)将步骤(2)获得的幼苗放入预先高温高压灭菌的捣碎器中进行捣碎；

(4)将步骤(3)获得的幼苗浆液通过移液枪注射到玻璃培养瓶中；

(5)将培养瓶进行密封并放入摇床中28摄氏度培养6至10天；

(6)将培养瓶中的内生真菌菌落挑出放置到玻璃皿的培养基上进行单独培养，获得内生真菌菌株。

其中，所述的步骤(3)的捣碎器为陶瓷捣碎器。

其中，所述的步骤(4)的移液枪头通过预先的高温高压灭菌操作。

其中，所述的步骤(6)的培养基为土豆琼脂培养基。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下显著优点：本发明的禾本科植物幼苗中内生真菌的分离方法真菌分离率高、杂菌含量少、操作简单、使用方便。

具体实施方式

实施例1：

本实施例的禾本科植物幼苗中内生真菌的分离方法，包括下述步骤，

(1)将禾本科植物幼苗从茎秆基部截断，整体带回操作室；

(2)将幼苗放入0.5％次氯酸钠溶液中清洗20秒，使用清水清洗3次后放在无菌纸上干燥待用；

(3)将步骤(2)获得的幼苗放入预先高温高压灭菌的陶瓷捣碎器中进行捣碎；

(4)将步骤(3)获得的幼苗浆液通过移液枪注射到玻璃培养瓶中，移液枪头通过预先的高温高压灭菌操作；

(5)将培养瓶进行密封并放入摇床中28摄氏度培养6天；

(6)将培养瓶中的内生真菌菌落挑出放置到玻璃皿的土豆琼脂培养基上进行单独培养，获得内生真菌菌株。

实施例2：