[发明专利]一种AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法

权利要求书

1.一种AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)病毒包装：先铺好HEK 293T细胞，待细胞密度达80～90％时换成无血清DMEM培养基，将提前按一定比例混合好的A、B溶液加入到培养基中，继续培养72h后收集病毒，将病毒液进行纯化、浓缩，并检测病毒滴度和纯度，即得病毒液；

(2)病毒感染：将T细胞铺于96孔板中，CD3/CD28进行刺激以激活T细胞，待激活后的T细胞密度达70～80％时，加入步骤(1)制得的病毒液，病毒的感染复数MOI为10E6，24h后免疫荧光法结合流式细胞术检测细胞的感染效率。

2.根据权利要求1所述的AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法，其特征在于，所述的无血清DMEM培养基为：DMEM培养基+1％HEPES+1％P/S。

3.根据权利要求1所述的AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法，其特征在于，所述的A、B溶液混合液与培养基的体积比为(0.5～1.5):(8～10)。

4.根据权利要求3所述的AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法，其特征在于，所述的A、B溶液混合液与培养基的体积比为1:9。

5.根据权利要求1所述的AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法，其特征在于，所述的A、B溶液混合液的制备包括以下步骤：

(1)取DMEM 5ml与助感染试剂VGF-001 700μl混合，得溶液A；

(2)取DMEM 5ml与pHelper质粒96μg、pRC质粒60μg、携带GFP的AAV质粒53.8μg混合，得溶液B；

(3)将溶液A加到溶液B中，混匀，静置30min，即得。

6.根据权利要求1所述的AAV6型腺相关病毒体外高效感染T细胞的方法，其特征在于，所述病毒液的纯化方法为碘克沙醇密度梯度离心法。