[发明专利]用于血清中肝癌标志物联合检测的抗体及试剂盒

说明书

本发明涉及血清抗原检测技术，具体涉及一种用于血清中肝癌标志物联合检测的抗体及试剂盒。提供用于血清中肝癌标志物联合检测的抗体组合物，包括抗AFP的抗体对、抗GP73的抗体对、抗VEGF的抗体对、抗CD147的抗体对、抗AFU的抗体对中的至少两对，所述抗体对由作为包被抗体的第一抗体和作为检测抗体的第二抗体组成。该抗体组合物特异性强，同时检测AFP，GP73，AFU，VEGF，CD147时相互不受干扰；灵敏度高，检测AFP，GP73，AFU，VEGF的灵敏度均可达到250pg/ml，检测CD147的灵敏度可达到64pg/ml，能够用于血清中肝癌标志物的准确定量。

技术领域

本发明涉及血清抗原检测技术，具体涉及一种用于血清中肝癌标志物联合检测的抗体及试剂盒。

背景技术

癌症在全球的发病率呈上升趋势。2014年2月3日，世界卫生组织发表的《全球癌症报告2014》显示，中国新增癌症病例高居世界第一位，其中肝癌的新增病例和死亡人数均居世界首位。肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一，我国是乙肝大国，肝癌发病率占全球总数的55％。中晚期肝癌基本无有效治疗方法，对乙肝、肝硬化等高危人群进行肝癌肿瘤标志物的筛查和早期诊断是解决肝癌高死亡率的最有效措施。现有的检测肿瘤标志物的方法都是单指标的检测方法，存在特异性不强、灵敏度低等不足,特别是对早期肿瘤的检出率不高。而对每份标本进行多指标分析费用又很昂贵,需要的血清量较大。因此，我们需要多指标并行检测的技术来解决这一问题。

与肝癌相关的肿瘤标志物包括甲胎蛋白(Alpha-fetoprotein，AFP)，甲胎蛋白异质体3 (Alpha-fetoprotein Lens Culinaris Agglutinin 3，AFP-L3)，高尔基糖蛋白73(Golgi Protein 73， GP73)，血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)，细胞外基质金属蛋白酶诱导因子又名CD147(extracellular matrixmetalloproteinase inducer，EMMPRIN)，α-L-岩藻糖苷酶(α-L-fucosidase，AFU)等。临床上肝癌的诊断主要是通过血清检测AFP，B超发现肝脏结节，然后CT和MRI检查，其阳性率约60～70％。对于早期肝癌的诊断，GP73和 CD147的敏感性优于AFP。AFU与AFP同时测定，可提高原发性肝癌的诊断阳性率达93.1％。 VEGF含量与TNM分期呈正相关，术前检测VEGF水平对预测肝癌的侵袭、转移有重要意义。

Luminex悬浮芯片技术是美国Luminex公司在20世纪90年代中期开发的一种多功能的液相芯片分析平台，也称为液体芯片。它有机地整合了有色微球、激光技术、最新的高速数字信号处理和计算机技术，应用的荧光编码微球带有针对不同目标分子的特异性抗体，不同的微球可以自由组合，可以在一个25-50微升的样品内同时检测最多达100种不同的检测项目，具有重复性与稳定性好、高通量、检测指标可灵活选择，以及高灵敏度和高信噪比等诸多优点，适用于血浆中抗原类蛋白的分析以及重大疾病抗原标志物的定量分析，是一项具有重大意义的医学辅助检测手段。与传统的固相芯片相比，克服了固相芯片在大分子检测时受表面张力、空间效应等对反应动力学的干扰，使检测结果的稳定性和重复性得到很大的提高。

因此，获得肝癌标志物的特异性抗体，结合Luminex悬浮芯片技术对血清中肝癌标志物进行定量检测，将有助于提高早期肝癌的检出率。

发明内容

根据上述领域在血清肿瘤标志物多指标并行检测技术中存在的需求和不足，本发明提供一种用于血清中肝癌标志物联合检测的抗体及试剂盒，适用于检测血清肝癌标志物AFP， AFP-L3，GP73，VEGF，AFU和CD147中两种及以上的抗原，具有灵敏度高、特异性好、省时省力、检测成本低、体系稳定的优点。

请求保护的技术方案如下：