[发明专利]一种天然抗氧化剂灰喇叭菌多糖CCPP‑1及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种天然抗氧化剂灰喇叭菌多糖CCPP-1及其制备方法和用途，属于食品加工领域。

背景技术

真菌多糖是通过对其子实体或者经过发酵产生的菌丝体、发酵液中分离得到的一种活性多糖。近年来，真菌多糖因其广泛的生物活性和天然无副作用的功效受到越来越多的关注和研究。多糖在免疫调节、抗氧化、抗肿瘤方面具有重要的生物或活性。大量的研究表明多糖具有抗氧化活性，如平菇多糖，灵芝多糖等。因此，多糖在食品、医药方面具有巨大的开发价值广泛应用于生物医学、食品营养健康等领域。

灰喇叭菌是一种菌体灰黑色的大型真菌，是蘑菇目、鸡油菌科、喇叭菌属的一个成员。灰喇叭菌产于四川及云南的深山老林中，可食用，是一种非常受欢迎的野生食用菌。目前这种食用菌深受欧洲的喜爱，被他们称为“美味佳肴”。

灰喇叭菌营养丰富，据文献报道，每百克干品中总脂肪占4.88％，粗蛋白占69.45％，灰分占12.22％，碳水化合物占13.44％，主要含有甘露糖，海藻糖等，具有很高的营养价值。目前研究大多集中于灰喇叭粗提取的抗菌活性、免疫活性、对癌细胞的抗癌活性和营养方面，对灰喇叭菌多糖的提取分离及生物活性的研究未见有文献报道。

发明内容

本发明旨在提供一种天然抗氧化剂灰喇叭菌多糖CCPP-1及其制备方法和用途，目的是从灰喇叭菌中分离纯化一种高抗氧化性的活性多糖，命名为CCPP-1，可作为一种天然的抗氧化剂，广泛应用于食品、医药和化妆品等领域。

本发明是从灰喇叭菌多糖中分离纯化抗氧化性的活性多糖组分，结果发现，灰喇叭菌多糖CCPP-1在400ug/ml对DPPH和羟基的清除能力几乎与VC相当，具有很高的研究价值和开发应用前景。

经过HPLC测定，本发明CCPP-1的分子量为1.85×10⁶Da，其单糖组成按摩尔比构成为葡萄糖：鼠李糖：甘露糖：木糖：葡萄糖醛酸＝0.47：0.05：1：0.86：0.006。

本发明天然抗氧化剂灰喇叭菌多糖CCPP-1的制备方法，包括提取和分离纯化各单元过程：

所述提取过程包括如下步骤：

1、称取100g灰喇叭菌子实体烘干粉碎并过80目筛得到粉料；

2、将步骤1得到的粉料加入双蒸水中，75-85℃下浸提4h，料液比1g：30mL，提取三次，合并提取液并浓缩至100mL，浓缩液经4000r/min离心10分钟，取上清液；

3、将步骤2得到的上清液加入95％的乙醇中，4℃静置8-12h，4000r/min下离心20min，收集沉淀物；

4、将步骤3得到的沉淀物用双蒸水溶解，旋转蒸发仪旋蒸除去残留的乙醇，得到粗多糖溶液；向粗多糖溶液中加入Sevage试剂，体积比为3:1，磁力搅拌1小时，4000r/min离心10分钟，保留上清液；Sevage试剂重复除蛋白5次，合并上清液，浓缩后于-80℃冷冻2h，冷冻后放入冻干机中于-56℃、0.10mbar下冻干2天，得到灰喇叭菌粗多糖；

所述分离纯化过程包括如下步骤：

1、将灰喇叭菌粗多糖用双蒸水配成10％的溶液，用DEAE-Sephorase F.F凝胶柱分离，上样量为10ml，0-1.5mol/L NaCl溶液梯度洗脱，流速为1ml/min，用AKTA仪器实时监测，经过3500Da的透析袋透析后，浓缩，-80℃冷冻2h，随后放入冻干机中于-56℃、0.10mbar下冻干2天，得到组分1；

2、将所得组分1用双蒸水配成0.1％的溶液，过0.22μm的过滤膜，用Superdex-75柱层析分离，双蒸水洗脱，流速1ml/min，用AKTA仪器实时监测，收集得到均一的灰喇叭菌多糖CCPP-1。

对分离纯化得到的CCPP-1进行体外抗氧化活性实验，结果表明：本发明提取的CCPP-1对DPPH、羟基自由基具有很高的自由基清除作用。

经HPLC分析测定，CCPP-1的分子量为1.85×10⁶Da，单糖组成按摩尔比构成为葡萄糖：鼠李糖：甘露糖：木糖：葡萄糖醛酸＝0.47：0.05：1：0.86：0.006。

本发明灰喇叭菌多糖CCPP-1的用途，是在食品、药品或化妆品领域作为抗氧化剂使用，对DPPH、羟基自由基具有显著的清除作用。

本发明的有益效果体现在：