[发明专利]1型糖尿病小鼠适量饮酒模型的构建方法

说明书

本发明公开了1型糖尿病小鼠适量饮酒模型的构建方法，属于医学动物实验方法；旨在通过建立糖尿病小鼠饮酒模型，为1型糖尿病及科学健康饮酒提供一定基础资料。方法是选用成年雄性C57BL/6J小鼠，灌胃饮酒后通过小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病小鼠模型。本发明具有较好的稳定性和可重复性，在稳定建立饮酒及1型糖尿病小鼠模型基础上，模拟糖尿病人饮酒并检测相应内分泌指标。

技术领域

本发明涉及一种医学评价、检测方法，主要涉及一种应用医学实验动物方法。

背景技术：饮酒是人类生活、社会发展不可或缺的一部分文化。饮酒与健康关系的研究，也正在受到越来越多的关注与重视。若饮酒不当，对消化、内分泌系统的影响相当明显。但是适量饮酒则不同。从心血管方面来看，适量饮酒者的血压水平较不饮酒者及戒酒者低。还有研究表明心肌病患者从过量饮酒改为适量饮酒后，心功能又得到恢复。通过某白酒对小鼠灌胃后观察到，一定剂量范围内的白酒可使小鼠的抗氧化能力增强。如何适度饮酒显得尤为重要。

糖尿病是一个世界范围内的健康问题，其中1型糖尿病(type 1diabetesmellitus，T1DM)临床症状较严重且多累及年轻人，其患病率也以2％～5％的速度增长。目前认为T1DM是T细胞介导的胰岛B细胞选择性被破坏的自身免疫性疾病，T1DM患者在遗传及环境因素的共同作用下，引起选择性破坏胰岛B细胞，导致胰岛素(insulin，Ins)绝对缺乏，血糖升高，从而引发T1DM。建立较理想的动物模型来研究该病的发病机制、预防和治疗具有重要意义。常用的糖尿病动物模型有实验性糖尿病动物模型和自发性糖尿病动物模型。诱导动物发生糖尿病的药物很多，其中链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)对实验动物的胰岛B细胞具有高度选择性的毒性作用，且对机体组织毒性相对较小，造模长期稳定性好，是目前国内外普遍用于制备糖尿病动物模型的药物；且小剂量多次注射STZ，使免疫细胞浸润胰岛，诱导C57BL/6J小鼠发生T1DM，更加贴近人类T1DM的发病进程。

与普通酒精相比，食用白酒制作工艺特殊，含有吡嗪类化合物、萜烯等生物活性物质。现代研究对饮酒与糖尿病的关系仍存在争论，有研究认为饮酒可能增加T1DM患者微血管并发症，另有研究则显示适量饮酒能够提高Ins敏感性。目前对饮酒糖尿病的研究主要为对糖尿病饮酒者的定期调查回访和临床疗效研究，具有简便、调查范围广等优点，但易受到被调查者个人因素的影响，实验时间过长，所需经费较高。而动物模型多见于饮用酒精而非食用白酒，且缺乏相关形态学资料。

发明内容：

本发明在建立较稳定饮酒小鼠模型及糖尿病小鼠模型基础上，通过小鼠模拟糖尿病人饮用食用白酒，能够较好的弥补上述实验的缺陷，关注不同发病时间点不同剂量饮酒对糖尿病小鼠血糖、胰岛的影响，为糖尿病人适量饮酒提供一定的基础资料。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案具体步骤如下：

a体重18-20g的雄性C57BL/6J小鼠，适应性喂养1周；分为低剂量组及高剂量组，连续灌胃饮酒至取材，每天1次；低剂量组饮酒剂量为2.5ml/kg，高剂量组饮酒剂量为5ml/kg。

b于第5周起，腹腔注射STZ 40mg/kg，每天1次，连续注射5天。

c自开始腹腔注射STZ后第3、7、10、14、21、28天取尾尖血测空腹血糖，取胰尾组织。

与现有技术比较，本发明通过小鼠饮用食用白酒，建立1型糖尿病小鼠模型，模拟糖尿病人饮酒，关注小鼠胰腺原位的形态学改变，具有较好的稳定性和可重复性。

附图说明

图1为免疫组织化学显示胰岛B细胞，标尺＝40μm，观察胰岛B细胞Ins的表达改变。

图2为胰岛B细胞的平均光密度值，检测胰岛B细胞Ins的表达量变化

图3为胰岛B细胞的面数密度值，检测胰岛B细胞数量的改变