[发明专利]一种蜂蜜基质中磺胺类抗生素的快速筛查方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品中抗生素筛查技术领域，特别涉及一种蜂蜜基质中磺胺类抗生素的快速筛查方法。

背景技术

磺胺类(sulfonamides)药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称,主要用于预防和治疗细菌感染性疾病。由于其广谱高效的抗菌性,目前被广泛应用于畜牧和水产养殖生产。用于养蜂业中可以防治蜂病、降低蜜蜂死亡率、提高蜜蜂生产性能,但是由于其在动物体内代谢降解缓慢,如果不遵守休药期规定、超量使用,易造成蜂产品中磺胺类药物残留。常用的磺胺类抗生素的名称见表1。

表1

我国国家安全标准GB14963-2011中要求蜂蜜中兽药残留限量应符合相关标准的规定。相关标准规定包括:1.卫生部在2011年4月发布了《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》中指出蜂蜜中可能添加了磺胺类抗生素。2.无公害蜂蜜(NY5134-2008)中对抗生素的安全指标是四环素族抗生素≤0.5mg/kg，磺胺类抗生素类≤0.05mg/kg，其他兽药限量应符合国家有关规定。

目前食品安全问题越来越受到人们的关注,准确、灵敏、高效的检测技术已成为一种发展趋势,文献报道的蜂蜜中磺胺类化合物的检测方法有气相色谱法,酶联免疫法,液相色谱紫外或荧光检测法,液相色谱-质谱联用法等。气相色谱法需要进行样品的衍生化处理,操作比较繁琐；酶联免疫法虽然简便快速,但是往往回收率,准确度有一定的欠缺；液相色谱紫外或荧光检测虽可以达到较好的分离,但是为实现杂质分离,需要较多时间,而且紫外法检测灵敏度低,荧光法一般也需要衍生化处理。液相色谱-质谱联用技术其准确性和灵敏度都比较高，但是对样品预处理的要求较高，样品预处理繁琐，分析时间较长。

发明内容

本发明提供一种蜂蜜基质中磺胺类抗生素的快速筛查方法，用以解决现有技术中蜂蜜基质中抗生素残留无法快速、准确筛查的问题。

本发明提供一种蜂蜜基质中磺胺类抗生素的快速筛查方法，包括：

(1)称取待测蜂蜜样品5g，加入适量同位素标记物，60℃水浴加热搅拌2小时；

(2)加入2mol/L盐酸酸解溶液，酸解温度为25℃，酸解时间为2小时；

(3)用氢氧化钠溶液调节PH值至4.5；

(4)加入乙腈10mL、二氯甲烷2.5mL和氯化钠0.5g后，振荡10min，以5000rpm的速率离心5min，移取上层清液10mL于15mL一次性离心管。

(5)45℃水浴氮气吹干，用乙腈复溶，过GPH滤膜，得到待测样品溶液；

(6)使用移液枪定量滴加所述待测样品溶液在DIP-it管上；

(7)采用实时直接分析质谱离子源DART-MS/MS对所述待测样品溶液进行检测。

设置实时直接分析质谱离子源DART-MS/MS参数：正离子采集，多反应监测(MRM)模式，载气氦气，载气温度350℃，样品传输速度0.6mm/s。

本发明实施例的方案与目前文献和国标方法比，其特点在于：

(1)充分优化了酸解条件，包括酸解溶液、温度、时间，与传统方法比大大提高了酸解效率，使得与蜂蜜中单糖发生结合的磺胺类药物最大效率的解离；

(2)通过同位素标记物内标的加入，进一步提高了方法的准确性。同时提出一种更为科学合理的同位素内标平衡方式，即使同位素标记物能够首先与蜂蜜中葡萄糖结合，有效模拟实际样品中磺胺的存在状态；

(3)改进了DART传统进样方式，有效提高DIP-it进样方式的精密度；

(4)直接进样分析的磺胺类抗生素残留的快速筛查方法，单个样品的仪器分析时间从14min提高到2s，显著提高分析效率。

本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在所写的说明书、权利要求书、以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。

下面通过附图和实施例，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1为葡萄糖与磺胺噻唑的反应原理图；

图2为蜂蜜中磺胺类抗生素DART-MS-MS检测谱图。

具体实施方式