[发明专利]一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法

说明书

一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法，包括如下步骤：(1)将尿液浓缩后调节pH至10‑11；(2)向步骤(1)所得溶液中加入硅藻土后过滤，所得硅藻土滤渣经处理得到较高纯度的尿激酶粗品；(3)将步骤(2)过滤后的滤液调节pH至5‑6，然后将促卵泡激素和黄体生成素进行沉淀，加入硅藻土处理后得到促卵泡激素和黄体生成素粗品。本发明的提取方法可以同时从妇女尿液中提取尿激酶，促卵泡激素和黄体生成素等尿蛋白，实现了经济效益和环境保护的双重目的。

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法。

背景技术

促卵泡激素(Follicle-stimulating hormone，FSH，亦称为卵泡刺激素) 是一种由脑垂体合成并分泌的激素，属于糖基化蛋白质激素，因最早发现其对女性卵泡成熟的刺激作用而得名。后来的研究表明，促卵泡激素在男女两性体内都是很重要的激素之一，调控着发育、生长、青春期性成熟、以及生殖相关的一系列生理过程。促卵泡激素和黄体化激素在生殖相关的生理过程中协同发挥着至关重要的作用。

黄体生成素又称促黄体素(Luteotropic hormone，LH)，垂体前叶嗜碱性细胞所分泌的激素，为糖蛋白，分子量约30000，由a和b两个亚基肽链以共价键结合而成。在有促卵泡激素存在下，与其协同作用，刺激卵巢雌激素分泌，使卵泡成熟与排卵，使破裂卵泡形成黄体并分泌雌激素和孕激素，刺激睾丸间质细胞发育并促进其分泌睾酮，故又称间质细胞促进素。

尿激酶(Urokinase，UK)为从健康人尿中分离的，或从人肾组织培养中获得的一种酶蛋白，由分子量分别为33000(LMW-tcu-PA)和54000 (HMW-tcu-PA)两部分组成。尿激酶直接作用于内源性纤维蛋白溶解系统，能催化裂解纤溶酶原成纤溶酶，后者不仅能降解纤维蛋白凝块，亦能降解血循环中的纤维蛋白原、凝血因子Ⅴ和凝血因子Ⅷ等，从而发挥溶栓作用。尿激酶对新形成的血栓起效快、效果好；还能提高血管ADP酶活性，抑制ADP诱导的血小板聚集，预防血栓形成。尿激酶在静脉滴注后，患者体内纤溶酶活性明显提高；停药几小时后，纤溶酶活性恢复原水平。

妇女尿液尤其是绝经妇女尿液中含有较高含量尿蛋白，如促卵泡激素，黄体生成素以及尿激酶等。传统的提取生产工艺中，只从绝经妇女尿液中提取促卵泡激素或/和黄体生成素粗品，再经深加工制成尿促性素或尿促卵泡素等原料药用于治疗不孕不育症，如CN102464713A、CN 1262278A、 CN 1415628A等中公开的方法。然而上述方法中其中大量的尿激酶等其他蛋白质均作为杂质而存在于废尿液中，既浪费了经济效益又污染环境。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种从妇女尿液尤其是绝经妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法。本发明的提取方法可以同时从妇女尿液中提取尿激酶，促卵泡激素和黄体生成素等尿蛋白，实现了经济效益和环境保护的双重目的。

为达上述目的，本发明采用如下技术手段：

一种从妇女尿液中提取多种尿蛋白的方法，包括如下步骤：

(1)将尿液浓缩后调节pH至10-11，例如为10.2、10.5、10.8等；该步骤中浓缩是为了除去尿液中的无机盐和大部分水；且由于尿激酶等蛋白质属于碱性蛋白，其等电点大约在10-11之间，因此会从溶液中沉淀出来，而酸性的促卵泡激素和黄体生成素均存在于溶液中；可见该pH范围可以更好地使尿激酶等属于碱性的蛋白质完全分离出来；

(2)向步骤(1)所得溶液中加入硅藻土后过滤，所得硅藻土滤渣经处理得到较高纯度的尿激酶粗品；所得硅藻土滤渣中含有大量尿激酶粗品，加入硅藻土则有利于将尿激酶过滤出来；

(3)将步骤(2)过滤后的滤液调节pH至5-6，例如为5.3、5.6、5.9 等，然后将促卵泡激素和黄体生成素等酸性蛋白进行沉淀，加入硅藻土处理后得到促卵泡激素和黄体生成素粗品。该步骤中的pH范围可以更好地使促卵泡激素和黄体生成素完全分离出来。