[发明专利]包含不完全发夹的核酸

说明书

本发明提供了一种RNA，所述RNA在5'至3'方向上包含第一序列和第二序列，所述第一序列通过间隔子序列与所述第二序列间隔开，所述第一序列和所述第二序列基本上互补并且经由沃森‑克里克碱基配对形成双链体，所述第二序列能够与生物体中靶基因的mRNA杂交，所述RNA基本上呈发夹的形式，所述第二序列沿着其杂交的区域与所述mRNA完全互补，所述第一序列包含不与所述双链体的所述第二序列中的相应碱基沃森‑克里克碱基配对的核苷酸碱基，其中所述双链体不包含3个或更多个连续错配碱基的区域；或提供了一种RNA，所述RNA在5'至3'方向上包含第一序列和第二序列，所述第一序列通过间隔子序列与所述第二序列间隔开，所述第一序列和所述第二序列基本上互补并且经由沃森‑克里克碱基配对形成双链体，所述第一序列能够与生物体中靶基因的mRNA杂交，所述RNA基本上呈发夹的形式，所述第一序列沿着其杂交的区域与所述mRNA完全互补，所述第二序列包含不与所述双链体的所述第一序列中的相应核苷酸碱基沃森‑克里克碱基配对的核苷酸碱基，其中所述双链体不包含3个或更多个连续错配碱基的区域。

本发明涉及转录后基因沉默，特别是其作为可能的药剂用于控制有害生物体，诸如栽培作物的昆虫或其他有害生物的用途。

通过向生物体或细胞中引入双链RNA来控制基因表达的现象是熟知的，所述双链RNA的一条链包含与生物体或细胞中的靶必需基因的mRNA互补的序列。双链RNA可以通过许多已知方法产生。例如，在dsRNA是通过体外或体内转录系统产生的情况下，编码它的DNA可以包含表达RNA双链体的两条链的单个启动子，所述两条链被提供双链体的形成的间隔子隔开。因此，DNA中的序列是被间隔子隔开的第一序列和作为第一序列的反向互补序列第二序列，并且由此产生的dsRNA是呈发夹的形式。可替代地，dsRNA的第一序列和第二序列可以是双链DNA的转录产物，所述双链DNA的每条链包含启动子，所述启动子驱动DNA的互补有义链和反义链上的序列在相应的5'至3'方向上表达。

虽然从DNA模板提供发夹dsRNA通常是熟知和常规的，但是存在与这种提供相关的问题-特别是RNA聚合酶对转录编码发夹-dsRNA的DNA的阻抗性。

本发明至少在某种程度上提供了对该问题的解决方案。

根据本发明，提供了RNA，所述RNA在5'至3'方向上包含第一序列和第二序列，所述第一序列通过间隔子序列与所述第二序列间隔开，所述第一序列和所述第二序列基本上互补并且经由沃森(Watson)-克里克(Crick)碱基配对形成双链体，所述第二序列能够与生物体中靶基因的mRNA杂交，所述RNA基本上呈发夹的形式，所述第二序列沿着其杂交的区域与所述mRNA完全互补，所述第一序列包含不与所述双链体的所述第二序列中的相应碱基沃森-克里克碱基配对的核苷酸碱基，其中所述双链体不包含3个或更多个连续错配碱基的区域。

本发明还提供了相应的RNA，所述RNA在5'至3'方向上包含第一序列和第二序列，所述第一序列通过间隔区序列与所述第二序列间隔开，所述第一序列和所述第二序列基本上互补并且经由沃森-克里克碱基配对形成双链体，所述第一序列能够与生物体中靶基因的mRNA杂交，所述RNA基本上呈发夹的形式，所述第一序列沿着其杂交的区域与所述mRNA完全互补，所述第二序列包含不与所述双链体的所述第一序列中的相应核苷酸碱基沃森-克里克碱基配对的核苷酸碱基，其中所述双链体不包含3个或更多个连续错配碱基的区域。

为避免疑义，当提到序列的长度时，意指序列中通过磷酸二酯或硫代磷酸酯键连接在一起的连续核苷酸的数目。因此-双链体序列的长度可以是100个核苷酸-这意指该序列中有200个核苷酸。

关于沿着其杂交的区域与所述mRNA完全互补意指当第一序列或第二序列(视情况而定)与来自靶基因的mRNA杂交时，在杂交区内没有含有任何碱基错配的位置-意指腺嘌呤总是与尿嘧啶碱基配对并且鸟嘌呤总是与胞嘧啶碱基配对。

关于双链体意指双链的。

根据本发明的RNA是呈通常熟知的茎/环结构(也称为发夹)的形式。