[发明专利]一种基于磁共振成像(MRI)的三聚氰胺检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品检测领域。

背景技术

食品安全一直是人们关注的重点，早在2008年9月，中国发生震惊国人的三鹿奶粉事件，这便是不法商贩利用“凯式定氮法”来确定蛋白质含量的检测漏洞，通过人为添加三聚氰胺，达到提高蛋白质含量的目的。使得食用者发生泌尿系统疾病甚至导致死亡(周丽,徐新云.三聚氰胺毒性作用及其对健康的危害[J].职业与健康,2010(23):2857-2859.)。

三聚氰胺(Malemine，化学式：C₃N₃(NH₂)₃)，俗称密胺蛋白精，是一种三类含氮杂环有机化合物，含有三个氨基官能团，水溶液状态带有正电性。三聚氰胺作为一种工业原料，广泛用于涂料、塑料、黏合剂、纺织、造纸等工业生产，不可用于食品加工或食品添加。目前，常用的含乳食品中三聚氰胺检测方法主要包括：高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)、气相色谱-质谱法(GC-MS)等。这些方法所用仪器都较为昂贵，且样品前处理复杂，检测耗时严重，较难实现经济简单高效应用。(王明辉.乳制品中三聚氰胺的检测方法[J].现代畜牧科技,2016(5):179-179.)。

随着纳米技术的不断完善和发展，基于磁性纳米材料独特的磁学性质，以及其良好的表面可修饰性和生物相容性，磁性纳米粒子在各个研究领域的应用越来越广泛，例如，利用磁性纳米材料的磁学性能开发的肿瘤磁热治疗技术、磁性细胞分离技术、药物靶向运输技术等，具有良好的发展前景。同时，纳米技术的广泛应用也推动了多学科交叉的新型检测技术的发展。目前，基于核磁共振造影剂成像原理，研究合成功能化的磁性纳米粒子造影剂，利用其特殊的磁学性质及对弛豫时间的影响来定性与定量检测目标分析物的方法，不仅对样品前处理要求不高，且方法简单高效，已经成为了当下分析检测学的新突破和研究热点。

顺磁性金属锰原子核外有5个不成对的电子，具有较高的磁化率，并且锰离子的毒性低，因此近年来氧化锰(MnO)磁性纳米粒子作为核磁共振T1造影剂的应用越来越广泛。CN103920168也报道了基于氧化铁磁性纳米粒子检测三聚氰胺的核磁共振传感器及其制备方法和应用，但是其所使用的核磁共振传感器为T2造影剂Fe/Fe₃O₄磁性纳米粒子，其制备过程中需要用到苛刻的合成和分离条件：反应必须在惰性气体下进行，反应产物必须通过柱色谱分离提纯。

发明内容

本发明目的在于提供一种基于磁共振成像的新的三聚氰胺检测方法。通过构建三聚氰胺诱导MnO磁性纳米粒子的团聚现象，建立核磁共振造影剂弛豫时间的改变与三聚氰胺浓度间的关系，来实现对三聚氰胺的检测。

本发明的技术方案如下：

一种基于磁共振成像的三聚氰胺检测方法，包括如下步骤：

1)制备经过二巯丁二酸改性的MnO纳米材料，即MnO-DMSA,制备方法为：

醋酸锰(Mn(Ac)₂)与三辛胺(TOA)与油酸(OA)按照摩尔比为(1.5-10):17:(1.5-6)，在290-320℃恒温反应10-30min。反应产物MnO纳米晶体用乙醇清洗2-3次。

再称取二巯基丁二酸(DMSA)，同时量取二甲亚砜(DMSO)溶液，配置成1-10mg/mL的DMSA/DMSO溶液A。然后取MnO的纳米晶体，重新分散于乙醇溶液中，得到1-10mg/ml的材料溶液B。将上诉溶液A和溶液B按体积比(1-5)：(1-5)充分震荡混匀后，涡旋振荡过夜(优选为800-1000r/min)。离心收集产物，用无水乙醇和去离子水清洗各2～3次，最后将收集的MnO-DMSA分散在去离子水中。

2)将MnO-DMSA纳米材料配制成标准溶液，其为标准溶液一；同时配制三聚氰胺标准溶液，其为标准溶液二；标准溶液一浓度为0.1-10mg/mL，标准溶液二浓度为10^-4-mM-10^-2mM；

3)在不同试管中加入不同系列体积的标准溶液一以及不同系列体积的标准溶液二；随后加入适量的纯水，使得每管中的溶液体积补齐至同一体积，此为体积一；将每个试管剧烈涡旋使材料充分混匀；

4)再向上述所有试管加入体积二的琼脂溶液，剧烈涡旋2-10min，直至材料充分摇匀固定，琼脂溶液质量体积分数为0.5-5％；体积一：体积二为1:5-5:1；