[发明专利]一种解淀粉芽孢杆菌高密度发酵方法及其菌剂制备方法

说明书

本发明提供一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的高密度发酵方法及其菌剂制备方法。高密度发酵培养基含有麸皮或葡萄糖、豆粕或酵母膏、NaCl、MgSO₄、CaCO₃、初始pH 6.0‑7.0，麸皮与豆粕可分别用葡萄糖与酵母膏代替。在1000L发酵罐规模条件下有效活菌数达8.3×10⁹cfu/mL以上、芽孢数达7.6×10⁹cfu/mL以上、产孢率达91.6％以上。所述菌剂制备方法包括离心收集菌泥与喷雾干燥得干粉制剂，干粉制剂中有效活菌数≥9.0×10¹⁰cfu/g，室温下保质期达18个月。本发明发酵工艺简单，原料廉价易得，成本低，适合工厂大规模生产。

技术领域

本发明涉及一种微生物发酵技术领域，具体涉及具体涉及一种具有生防功能的解淀粉芽孢杆菌高密度发酵方法及其干粉菌剂制备方法。

背景技术

植物病害不仅降低作物产量与品质，造成直接经济损失，而且这些植物病害会产生有毒物质，对人畜健康造成威胁，严重制约农业的可持续发展。目前植物病害防治主要以抗病品种与化学防治为主，然而抗病品种的筛选周期长且难度大，而化学防治易造成环境与食品污染，随着人类对环境和食品安全质量的要求愈来愈高，化学防治亦愈来愈不受欢迎。绿色、无污染对人畜无害的生物防治成为近年来研究植物病害防治的热点，其中拮抗细菌在生物防治中发挥着重要作用。

目前在拮抗细菌中研究最多的是芽孢杆菌，芽孢杆菌是植物与土壤中的优势微生物种群，大多数为非致病菌，且许多优良菌株对多种植物土传病害具有拮抗作用。芽孢杆菌本身具有种类繁多、抗逆性强、繁殖速度快、易定植于植物根际表面等优点。

解淀粉芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种，解淀粉芽孢杆菌能够分泌抗菌蛋白、抗生素、酶或多肽等活性物质，对植物病原原菌、真菌、病毒、线虫有很好的抑制作用，显著提高植物的抗病性，同时能促进植物生长，提高植物的产量，是一种很好的生防促生菌。目前生防解淀粉芽孢杆菌在瓜果蔬菜等经济作物的枯萎病、灰霉病、疫霉病、炭疽病、青枯病等植物病害均具有显著的防效。

活菌数与芽孢得率是衡量解淀粉芽孢杆菌菌剂的非常关键指标，但目前国内外对解淀粉芽孢杆菌发酵工艺的研究主要集中在产抗菌脂肽、淀粉酶、蛋白酶等酶类物质，较少进行生防解淀粉芽孢杆菌高密度发酵优化研究，且高密度发酵工艺优化中多数只提高活菌数，而芽孢形成率偏低，芽孢率低将降低菌剂的活性和质量稳定性，因此不适合推广使用，生产成本高。因此，开发一种既具有生防功能，又有高芽孢率的菌剂产品将变得非常有意义。

发明内容

本发明的目的在于利用廉价碳氮源液体发酵生产生防解淀粉芽孢杆菌菌剂，降低其生产成本，提高单位体积发酵液中的活菌数及芽孢得率，为生防解淀粉芽孢杆菌菌剂的工业化生产以及推广提供参考依据。

本发明首先提供一种用于发酵解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)的发酵培养基，含有以下原料：麸皮或葡萄糖、豆粕或酵母膏、NaCl、MgSO₄、CaCO₃。

优选地，本发明的发酵培养基含有以下原料：麸皮10-30g/L、豆粕10-30g/L、NaCl1-4g/L、MgSO₄ 0.5-1.5g/L、CaCO₃ 0.5-1.5g/L、pH 6.0-7.0。

更优选地，本发明的发酵培养基含有以下原料：麸皮15-25g/L、豆粕15-25g/L、NaCl 1-3g/L、MgSO₄ 0.8-1.2g/L、CaCO₃ 0.8-1.2g/L、pH 6.0-7.0。