[发明专利]一种采用分光光度法测定鱼皮中羟脯氨酸的含量的方法

说明书

本发明公开了一种分光光度法测定鱼皮中羟脯氨酸的含量的方法，结果显示，采用该法测定两种鱼皮中羟脯氨酸的含量分别为0.823%和2.247%,平均回收率分别为98.47%和98.39%,变异系数分别为1.65%和0.64%。该法重复性好,可信度高,可作为判定鱼皮中胶原蛋白含量的一个定量指标。

技术领域

本发明属于食品检验领域。具体涉及鱼皮中羟脯氨酸含量的测定方法。

背景技术

鱼皮中含有大量的蛋白质, 其中含量最多的为Ⅰ型胶原蛋白，最高可超过其蛋白质总量的 80 %，较鱼体的其他部位要高许多，有研究报道真鲷鱼皮中胶原蛋白 含量占粗蛋白的80.5 %, 鳗鲡则高达87.3 %。胶原蛋白的氨基酸组成主要为脯氨酸、甘氨酸和丙氨酸。其中Ⅰ型胶原蛋白中甘氨酸( Gly) 占30 %,脯氨酸(Pro)和羟脯氨酸（Hyp）占约25 %，在一般动物蛋白质中的羟脯氨酸含量极微。目前，胶原蛋白的含量是根据羟脯氨酸的含量再乘以相应的系数而得到的。测定羟脯氨酸的方法有多种，包括分光光度法、氨基酸分析仪法、HPLC 法和电泳法等，其中以分光光度法最为常用，如测定动物组织、猪肉、胶原海绵和鱼鳞中羟脯氨酸的含量。为了准确地评价鱼皮中羟脯氨酸及胶原蛋白的含量，本文探索了采用分光光度法测定鱼皮中羟脯氨酸含量的可行性和准确性，以便于鱼皮中胶原蛋白的进一步开发和利用。

发明内容

本文采用分光光度法测定鱼皮中羟脯氨酸的含量的方法，与离子色谱法相比，其操作简捷且结果准确，仪器易普及，适合在各食品企业推广使用。

本发明包括以下步骤：

（1）样品提取

准确称取经解冻晾干的鱼皮1g（精确至0.001g）于碘量瓶中, 样品不得粘附碘量瓶内壁, 加入6mol/L的盐酸50mL于120℃～130℃下水解8h。水解完成后将水解物用蒸馏水定容至100mL, 用滤纸过滤, 收集滤液于锥形瓶中, 加入活性炭以去除色素, 再过滤,取滤液1mL, 用0.1mol/L NaOH 调节pH=6.5～7.0, 定容到50mL备用。

（2）样品测定

在特定的波长560nm下测定其吸光度值，根据标准曲线计算出羟脯氨酸的含量。

附图说明

图1 羟脯氨酸标准曲线。

具体实施方式

下面将详细说明本发明的具体实施方式：

1.仪器、试剂及材料：

仪器：

电热恒温鼓风干燥箱；BP221S(赛多利斯) 电子天平；721分光光度计；HWS26

型电子恒温水浴锅等。

试剂：

6mol/L盐酸, 0.01mol/L盐酸, 0.1mol/LNaOH溶液；柠檬酸缓冲液：柠檬酸钠120 g,冰醋酸12mL,柠檬酸46g,氢氧化钠34g溶解于蒸馏水中,定容至1000 mL,临用时调整pH=6.0；0.05mol/L氯胺T溶液：称取氯胺T7.05g,溶解于100mL蒸馏水中, 然后加入乙二醇独甲醚150mL,再加入250mL柠檬酸缓冲液混合均匀；对二甲基氨基苯甲醛试剂：取无水乙醇20mL慢慢加入浓硫酸2.74mL作为A液，取对二甲基氨基苯甲醛12.0g, 缓慢加入无水乙醇40mL, 水浴加热使其完全溶解并冷却至室温,作为B液。然后将A液慢慢加入B,混合均匀；3.5mol/L高氯酸溶液：取27mL高氯酸