[发明专利]马杜霉素的免疫胶体金检测卡及其制备方法

说明书

本发明马杜霉素的免疫胶体金检测卡及其制备方法，涉及动物源食品兽药残留检测技术领域。本发明的检测卡外壳中的试纸条，由PVC胶板、样品垫、胶体金结合垫、包被膜和吸水垫组成；胶体金膜为含马杜霉素单克隆抗体的玻璃纤维素膜，包被膜是硝酸纤维素膜，其上设有T线和C线，T线包被有马杜霉素蛋白质偶联物，C线包被有羊抗鼠IgG抗体。本发明有效用于快速检测马杜霉素，方便、快捷、结果准确。

技术领域

本发明涉及谷物食品中农药残留检测技术领域，特别是涉及马杜霉素的免疫胶体金检测卡及其制备方法。

背景技术

马杜霉素 英文名称Maduramicin,又名马度米星.是一种较新型的聚醚类一价单糖苷离子载体抗生素，本品抗球虫谱广对子孢子和第一代裂殖体均有抗球虫活性。本品能有效控制6种常见的鸡球虫，对鸭球虫病也有良好的预防效果。混饲，每1000 kg饲料5～10g马杜霉素由美国氰胺公司于20世纪80年代开发，1992年我国开发成功并大批量生产，由于价格较低，对球虫病具有良好的预防和治疗作用，使马杜霉素在临床得到广泛的应用。但该药毒性较大，安全范围窄，使用剂量非常接近鸡的中毒量，超量使用易引起禽中毒。家禽马杜霉素中毒一般为急性过程。急性死亡（1～ 2 d 内死亡）的动物一般会出现典型的中毒症状：东走西窜、站立不安、兴奋亢进等神经症状，或水样腹泻、腿软、行走及站立不稳。严重者两腿麻痹，昏睡直至死亡。亚慢性中毒表现为减食甚至食欲废绝，迅速消瘦，粪便呈现色泽变化，从青灰、浅绿、绿色至胆绿色，出现率约 20% 左右。家禽精神不振、蹲伏驱赶不动，甚至两脚瘫痪、驱赶时跗关节着地，两翅拍动、无力站立，甚至死亡。 在临床应用时常因使用不当，造成家禽中毒，经济损失较大。Ft%HWGE

现有技术对于马杜霉素的检测主要是气相色谱-质谱法、高效液相色谱法等检测方法，但这些技术的缺陷明显：设备昂贵、操作复杂、难以推广。所以，建立一种简单、有效、适合基层使用的测定方法是极其必要的。本发明的目的是研制一种更适合企业进行现场检测且快捷简便、成本低廉的定性检测方法。

发明内容

针对以上情况，本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提供一种马杜霉素的免疫胶体金检测卡及其制备方法，可有效解决能快速、简便地检测出马杜霉素的问题。

本发明的马杜霉素胶体金检测卡，包括包被了单克隆抗体胶体金标记物的胶体金结合垫、包被了马杜霉素-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、PVC胶板和塑料模具组成，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。

本发明的马杜霉素胶体金检测卡的制备方法，是由以下步骤实现：

(1)胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl₄·3H₂O) 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠(Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；

(2)抗体的预处理：将要标记的马杜霉素抗体在1000 r/min, 4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS稀释成1 mg/ml，过0.22µm滤膜；