[发明专利]水稻小分子RNAosa-miR171b在抗水稻条纹叶枯病上的应用

说明书

本发明公开了水稻小分子RNA osa‑miR171b在抗水稻条纹叶枯病上的应用,本发明从水稻日本晴中高通量测序得到microRNA osa‑miR171b，用该microRNA构建到前体基因pre‑miR528序列中。该microRNA前体在水稻中过量表达osa‑miR171b，利用携带水稻条纹病毒的灰飞虱接种病毒后，转基因株系和野生型对照相比发病率和死亡率均降低，发病症状有所缓解。因此，在水稻中超表达osa‑miR171b对于提高水稻对水稻条纹叶枯病的耐受性具有重要意义，这为水稻耐受水稻条纹叶枯病分子育种提供新的资源和研究方法。

技术领域：

本发明涉及植物基因工程领域，具体涉及一种水稻小分子RNA osa-miR171b在水稻耐受水稻条纹病毒(Rice stripe virus，RSV)中的应用。

背景技术

水稻(Oryza sativa L.)是一种重要的粮食作物。水稻条纹叶枯病是通过灰飞虱(Laodelphax striatellus)传播的重要水稻病毒病害，给农业构成严重的威胁。

小分子RNA(microRNA)普遍存在于动植物体内，对其靶基因起着转录后调控的重要作用，从而调控生物体的许多性状。microRNA调控植物体许多靶基因，其中一些靶基因参与植物对病毒的抗性。

发明内容

本发明小组发现，通过超表达microRNA可以提高水稻的抗病性，从而为培育抗病水稻提供了一个新的途径。

一方面，本发明通过高通量测序得到长度为21nt水稻成熟microRNA，命名为osa-miR171b序列，其序列为：5’UGAUUGAGCCGUGCCAAUAUC 3’,(SEQ ID NO：1)。用该microRNA，osa-miR171b序列替换已知的osa-MIR528前体序列中的osa-miR528序列，得到人工miR171b序列osa-miR171b(SEQ ID NO：2)。经化学合成该序列DNA后，将该DNA片段连接至双元表达载体pCAMBIA1300UR(图1)。将该载体转化至EHA105农杆菌,利用农杆菌介导遗传转化在水稻中超表达osa-miR171b，利用携带水稻条纹病毒的灰飞虱接种病毒后，转基因株系和野生型对照相比发病率和死亡率均降低，发病症状有所缓解。因此，在水稻中超表达osa-miR171b能提高水稻对水稻条纹叶枯病的耐受性。

另一方面，本发明提供一段水稻小分子RNA osa-miR171b序列，该microRNA的核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示，其特征在，该小分子RNA通过转基因水方法能够制备耐受水稻条纹病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻。

另一方面，本发明提供一种制备耐受水稻条纹病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻的方法，其中，让microRNA核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示的基因序列转入到水稻中。

另一方面，本发明提供一段水稻小分子RNA osa-miR171b序列在制备耐受水稻条纹病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻上的用途，其中，所述的RNA osa-miR171b为SEQ ID NO:1所示的序列。

另一方面，本发明提供水稻人工小分子RNA osa-miR171b序列，该microRNA的核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示，其特征在于，该小分子RNA能够通过转基因方法制备耐受水稻条纹病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻。

另一方面，本发明提供一种制备耐受水稻条纹病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻的方法，其中，让核苷酸序列为SEQ ID NO:2所示的基因序列转入到水稻中。

另一方面，本发明提供水稻人工小分子RNA osa-miR171b基因序列在制备耐受水稻条纹病毒(Rice stripe virus，RSV)侵染的水稻中的用途，其中，所述的基因序列为SEQID NO:2所示的序列。