[发明专利]离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗的培养方法

说明书

本发明公开了一种离体无菌寄主植物‑菌根食用菌共生苗的培养方法和培养容器，所述这的培养方法包括：（1）准备离体无菌培养寄主植物；（2）无菌精准接种；（3）寄主植物‑菌根食用菌共生苗培养。所述的培养容器包括透明的容器、容器盖和三角形固定架，容器盖设有过滤通气窗，容器底部设有一个三角形固定架，三角形固定架上部设置一个带有缺口的圆形环，圆形环上部设有若干向外、固定弹性胶圈的小钩。本发明可以在温度、湿度和光照可控的环境条件下培育出寄主植物系统，使快速大量繁育共生苗成为现实，较现有技术的繁育速度提高了3‑12倍，接种成功率提高了1.6‑2.5倍，接种后寄主植物‑菌根食用菌共生苗的生成率较现有技术提高了30%‑50%。

技术领域

本发明属于食用菌生产技术领域，尤其是涉及一种寄主植物-菌根食用菌共生苗培育技术。

背景技术

松茸、块菌、牛肝菌等菌根性食用菌与双孢蘑菇、香菇、平菇等腐生菌不同，菌根性食用菌是食用菌中重要的一类，它着生于活体植物的根系上，通过活体植物根系接受植物的光合成产物，同时将它本身从土壤中吸收的养分供给活体植物利用，即形成植物-食用菌共生关系。目前人工栽培是非常困难的。通常的做法一般是先培养寄主植物苗，以表面灭菌的种子在灭菌的培养基质中培养，将培养好的寄主植物苗，接种上菌根食用菌菌种，然后将接种后的寄主植物-菌根食用菌共生苗，在一定的温室或灭菌温室中培养，待菌根苗成长到一定程度大小，将其移植到生产场地，生成食用菌子实体。整个过程主要包括寄主植物无菌苗的培育，在寄主植物根系接种食用菌菌种，接种后的菌根苗的培养，以及养成的菌根苗移植到生产场地进行出菇培养。2013年第34卷第1期四川林业科技报道林强的研究事例，其寄主植物-菌根食用菌合成苗的制作方法是，收集云南松种子用水选法去除空壳种子，用0．1%的高锰酸钾液浸泡处理30min，然后再用清水浸泡1d～2d，灭菌处理后的云南松种子播入混合基质的培育箱中，培养基质在121℃～126℃的高压灭菌器下灭菌2.5h～3h放置一周后使用，播种后，用清水将基质浇透后放置于室内催芽，待80%以上的种子发芽后再移入炼苗室内进行无菌苗培育。将培育好的云南松无菌苗浸泡在自来水里至根部基质松解，在适宜的容器内装入上述灭菌基质，至2/3深度，然后用小勺舀一勺约3g接菌剂（菌根食用菌接种菌液），在容器基质表面，将云南松无菌苗栽入，使根部与菌剂接触，然后覆盖基质压紧，用水浇透，将接种苗放置在炼苗室培育半月，期间适当浇水，然后移到温室大棚育苗架上培养6个月。然而，现有技术存在的问题有：（1）寄主植物种子只能表面灭菌，以及寄主植物苗在培育过程中环境，尽管可以事先灭菌处理，但整个生长过程中难以做到真正的无菌培养，如空调的空气流动，人员的操作传染，以及温室角落的均无繁衍等等，因此容易造成杂菌污染。(2)寄主植物苗培养成功后，需要在寄主植物苗的根系上接种菌根食用菌的菌种，其接种方法一般是将植物根系在接种液中浸染，或者在植物根系造成创伤，如剪短一部分根系、剥皮、刺伤等，在创伤的部位接种菌种。然而这些方法难以确保在植物苗根系上确切接种成功，即接种成功率较低.(3)将接种后的植物苗栽植于培养基质中，这时容易造成接种的菌种流失乃至死亡，致使植物苗根系接种菌种浓度降低，从而减少寄主植物-菌根食用菌共生苗的成活率。(4)接种后的寄主植物-菌根食用菌共生苗，一般放在温、湿、光等可控条件下的温室中培养，这种温室事先是可以进行灭菌处理的，但是这种温室难以保证在寄主植物-菌根食用菌共生苗整个生育期间是无菌条件的。(5)菌根性食用菌其特点之一就是菌丝生长速度很慢，整个培育期将是长期的,在这个长期的培育过程中，培养基质的水分管理是十分困难的和难以准确掌握的，常常造成接种成功的寄主植物-菌根食用菌共生苗衰败和死亡。

发明内容

针对目前现行的寄主植物-菌根食用菌共生苗培养方法存在的缺陷，本发明的目的是提供一种离体无菌寄主植物-菌根食用菌共生苗的培养方法,该方法使寄主植物-菌根食用菌共生苗在全生长过程处于无菌可控条件下生长发育，可以达到在离体无菌条件培育出寄主植物系统，接种菌根食用菌菌种，形成离体无菌条件下的寄主植物-菌根食用菌共生苗系统。

为实现上述目的，本发明采用了下列技术方案。