[发明专利]山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角的角蛋白共有的特征肽用于羚羊角药材中掺伪的检测方法

说明书

本发明公开了一种山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角的角蛋白共有的特征肽用于羚羊角药材中掺伪的检测方法，包括黄牛角、水牛角、山羊角和绵羊角共有的特征肽,所述特征肽的序列为SQQQEPLVCPNYQSYFR。角蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程，包括如下步骤：步骤一：将角类样品采用胰蛋白酶酶解处理；步骤二：进行液质联用分析；步骤三：采用电喷雾正离子模式进行多反应监测，选择离子对715.33→572.28，910.52进行MRM扫描。本发明的有益效果是，通过一种山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角的角蛋白共有的特征肽用于羚羊角中掺伪的检测，能够快速的检出羚羊角药材中掺入的山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角成分。

技术领域

本发明涉及生物材料应用，特别是一种山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角的角蛋白共有的特征肽用于羚羊角药材中掺伪的检测方法。

背景技术

羚羊角是我国传统的名贵中药，具有平肝息风、清肝明目、散血解毒的功效，临床主要用于高热惊厥，在对小儿发热有很好的疗效。药典中规定羚羊角为牛科动物赛加玲羊Saiga tatarica Linnaeus的角。赛加羚羊数量稀少，属于濒危动物，是国家一级保护动物，已经严禁捕杀，这导致羚羊角的短缺，价格昂贵，一些不法商家在利益的驱动下在羚羊角粉末中掺入价格便宜的山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角。目前羚羊角成分的检测方法主要是性状和显微鉴定法，性状、显微鉴别法虽然简单快捷，但对于比较相近的角类药材缺乏专属性。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述问题，设计了一种山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角的角蛋白共有的特征肽用于羚羊角药材中掺伪的检测方法。

实现上述目的本发明的技术方案为，一种山羊角、绵羊角、水牛角、黄牛角的角蛋白共有的特征肽用于羚羊角药材中掺伪的检测方法，包括黄牛角、水牛角、山羊角和绵羊角共有的特征肽,所述特征肽的序列为SQQQEPLVCPNYQSYFR。

蛋白特征肽在羚羊角掺假检测中的应用流程，包括如下步骤：

步骤一：将角类样品采用胰蛋白酶酶解处理：取角样品粉末1mg，加1ml水超声10min，10000rpm离心10min收集沉淀；加1ml 50％乙醇超声10min，10000rpm离心10min收集沉淀；加入0.5ml变性缓冲液；加入25μl 1M DTT；90℃处理1h，加入60μl1M IAA，暗处反应1h，10000rpm离心10min，收集上清；取100μl上清加入10kd超滤管，10000rpm离心20min；加入0.4ml 25mM NH₄HCO₃洗涤3次；加100μl25mM NH₄HCO₃溶液到超滤管中，加入2μg胰蛋白酶；37℃反应16h；10000rpm离心10min收集滤液。

步骤二：进行液质联用分析：采用的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1％甲酸水溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，梯度洗脱：0→3min，流动相A为96％；3→8min，流动相A为96％→92％；8→10min，流动相A为92％→50％；10→12min，流动相A为50％；12→12.1min，流动相A为50％→95％；12.1→15min，流动相A为96％，流速为0.3ml/min。

步骤三：采用电喷雾正离子模式进行多反应监测，选择离子对715.33→572.28，910.52进行MRM扫描。

步骤一中，所述变性缓冲液为6M盐酸胍，1.2M Tris-HCl，2.5m MEDTA，pH8.4

步骤二中，所述色谱柱的内径为2.1mm。

步骤三中，所述电喷雾正离子模式以三重四极杆质谱作为检测器。

步骤三中，所述电喷雾离子源为ESI+。