[发明专利]一种突变的Nramp1基因及其应用

说明书

本发明提供了一种Nramp1突变蛋白及其用途。具体地，本发明所述突变蛋白第132位氨基酸由异亮氨酸(I)突变为苏氨酸(T)。本发明突变蛋白特异性表达于巨噬细胞中，具有更强的抗胞内菌活性，尤其适用于预防和治疗胞内菌引起的感染。

技术领域

本发明涉及基因工程领域。具体地，本发明涉及一种新的Narmp1突变基因及其在胞内菌感染中的应用。

背景技术

NRAMP1(又名SLC11A1)位于晚期溶酶体/内涵体膜上，是一种pH依赖型二价阳离子转运蛋白，分子量约90-110kDa。其含有十二个跨膜区，1-8跨膜区具有高度的同源性，在跨膜区5与6之间外膜侧，有2个N型糖基化位点，在跨膜区6与7之间内膜侧有一个进化上高度保守的转运功能域。

目前研究认为NRAMP1蛋白有协助巨噬细胞抵抗细菌感染的功能，其机制在于：巨噬细胞将病菌吞入吞噬体内后，可通过产生活性氧和/或氮的中间体杀伤病菌。有些细菌(例如结核菌)能够通过自身所产生的大量酶类(比如超氧化物歧化酶SOD)抵抗巨噬细胞杀伤作用。而这些酶的活性中心大多有金属离子的参与。Nramp1的功能是将金属离子从吞噬体内腔转运到细胞质内。由此，吞噬体内金属离子的损耗成了细胞内病原菌合成各类金属酶的限速步骤，从而限制了病菌生产活性酶的能力，阻止了寄生菌的增殖。相反地，一个有缺陷的Nramp1转运蛋白可引起吞噬体中金属离子的富集，致使生物体对病原体的敏感性增大。

尽管物种之间的Nramp1基因具有一定同源性，但一级序列仍存在较大差异，这些差异主要集中在位于吞噬体内的N末端和C末端，这些差异使各物种在抵抗细菌感染方面的能力存在差异。因此，本领域迫切需要开发一种能够提高NRAMP1抗菌能力的蛋白，用于加强人畜对细菌、尤其是胞内菌的抵抗能力。

发明内容

本发明提供了一种新的羊Nramp1突变蛋白及其编码核酸，以及其在抵抗胞内菌中的应用。

本发明第一方面，提供了一种羊天然抗性相关巨噬蛋白1(naturalresistance-associated macrophage protein 1，Nramp1)的突变蛋白，其特征在于，所述突变蛋白第132位氨基酸由异亮氨酸(I)突变为苏氨酸(T)。

在另一优选例中，所述突变蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.:1(MSGDTGTPNQGGTRYGSISSPPSPGPQQAPPGGTYLSEKIPIPDTESGAFSLRKLWAFTGPGFLMSIAFLDPGNIESDLQAGAVAGFKLLWVLLWATVLGLLCQRLAARLGVVTGKDLGEVCHLYYPKVPRTLLWLTIELAIVGSDMQEVIGTAIAFSLLSAGRIPLWGGVLITIVDTFFFLFLDNYGLRKLEAFFGFLITIMALTFGYEYVVARPAQGALLQGLFLPSCPGCGQPELLQAVGIVGAIIMPHNIYLHSSLVKSREVDRSRRADIREANMYFLIEATIALSVSFFINLFVMAVFGQAFYKQTNQAAFNICANSSLHDYATIFPRDNLTVAVDIYQGGVILGCLFGPAALYIWAVGLLAAGQSSTMTGTYAGQFVMEGFLKLRWSRFARVLLTRSCAILPTVLLAVFRDLQDLSGLNDLLNVLQSLLLPFAVLPILTFTSMPALMQEFANGLVSKIITSSIMVLVCAVNLYFVISYVPSLPHPAYFSLVALLAAAYLGLTTYLVWTCLITQGATHLAHSSHQRFLYGLPGEDQEEGRTSG)所示。