[发明专利]用于恶性肿瘤靶向治疗的siRap2b‑GNs偶联复合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，旨在制备一种新型制剂，用于肿瘤治疗，分类号为A61P。

背景技术

癌症，即恶性肿瘤，是一类严重威胁人类健康的疾病。据国际癌症研究署（IARC）发布的最新数据显示，全球每年有800多万人死于癌症，到2020年全球每年新增癌症患者将超过1700万，我国癌症年新发病例将由2012年的300万增长到近400万，因此研制高效的抗肿瘤制剂、制定更加有效的肿瘤治疗方案是目前急需解决的问题之一。

恶性肿瘤的形成与多种因素有关，其中肿瘤抑制基因p53及其信号通路的异常在肿瘤的发生发展过程中起着非常重要的作用。据报道，大约有50%的人类肿瘤都有p53基因的突变，而在p53没有突变的肿瘤中，与p53活化有关的途径大多都被破坏，从而导致p53失活。因此，多年来，p53一直是肿瘤研究的重点，而p53信号通路分子也是肿瘤治疗的重要靶点之一。

经研究发现，p53的新靶基因Rap2b具有促进肿瘤细胞生存的功能，降低Rap2b的胞内表达水平能显著提高阿霉素杀伤肿瘤细胞的效果，由此可以认为Rap2b与肿瘤细胞产生对阿霉素的耐药性有关。进一步研究发现，Rap2b在进化上高度保守，并在约80%肿瘤组织中呈现高表达。因此，理论上Rap2b可以作为一种重要靶点用于肿瘤的治疗，通过小分子干扰RNA（siRNA）降低Rap2b的胞内表达水平能显著提高阿霉素对肿瘤细胞的杀伤效果。

靶向制剂是目前肿瘤医学研究的热点，它能够将抗肿瘤药物最大限度地输送到靶器官，尽量降低药物在正常组织中的分布，从而达到高效低毒的治疗效果。近年来，基于纳米技术的靶向给药系统广泛应用于癌症的诊疗。粒径在10-1000 nm的纳米药物由于小尺寸效应而具有巨大的表面能，因此属于热力学不稳定体系和动力学稳定体系。这使它们具有许多不同于体相材料的优异的磁学、光电、光热等性质。此外，在肿瘤靶向治疗应用中，这些纳米粒子的最重要特质就是对实体瘤的高通透性和滞留效应——EPR效应，即相对于正常组织，纳米粒子具有更趋向于聚集在肿瘤组织的性质。正常组织中的微血管内皮间隙致密、结构完整，大分子和脂质颗粒以及纳米粒子不易透过血管壁，而实体瘤组织中血管丰富、血管壁间隙较宽、结构完整性差，淋巴回流缺失，造成纳米粒子具有选择性的高通透性和滞留性。这种现象使得纳米粒子所装载的药物能够靶向释药至肿瘤组织，并在高效杀伤肿瘤细胞的同时，降低对正常机体组织的毒性。

在体内环境下利用siRNA进行基因治疗的主要难点在于体内大量存在的RNA酶对外源RNA干扰序列的降解，因此开发能抑制RNA降解的合适药物载体对于改善siRNA在体内环境中的稳定性从而提高疗效具有重要意义。当前快速发展的纳米材料技术则为解决这一问题提供了一条重要思路。在各种纳米材料中，纳米金是常用的基因药物载体之一。

发明内容

本发明目的在于提供用于恶性肿瘤靶向治疗的siRap2b-GNs偶联复合物。

本发明用于恶性肿瘤靶向治疗的siRap2b-GNs偶联复合物的特征在于：在PEG修饰的金纳米壳上偶联siRap2b。

研究表明，金纳米粒子能够与供电基团（如巯基、氨基等）形成稳定的化学键。这一特性确保了金纳米粒子容易通过化学修饰连接多种药物。例如，基因类药物（如siRNA等）以较高的密度通过巯金键修饰在金纳米粒子四周时，纳米粒子表面的空间构象导致的空间位阻伴随着高密度核酸外壳的电子云形成了一种微环境，这种微环境能够抑制循环系统中RNA酶对siRNA的降解作用，从而保证了siRNA在体内环境下的稳定性。

本发明选用中空金纳米壳做为药物载体，偶联有siRap2b后可用于恶性肿瘤的靶向治疗。本发明以Rap2b为靶标，利用GNs具有金纳米粒子的所有优点，能够将药物（siRap2b）稳定高效地定向输送至肿瘤组织，实现对肿瘤细胞的高效杀伤，从而大大提高了肿瘤治疗效果。

本发明还提供了以上偶联复合物的制备方法。

用于恶性肿瘤靶向治疗的siRap2b-GNs偶联复合物的制备方法包括以下步骤：

1）将金纳米壳溶液和mPEG-SH-2000混合进行反应，制得PEG修饰的金纳米壳；

2）以DEPC水为溶剂，将PEG修饰的金纳米壳和siRap2b混合进行反应，制得siRap2b-GNs偶联复合物。