[发明专利]一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法

说明书

本发明涉及一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物制备方法，包括以下步骤，按顺序依次进行合成：（1）合成吖啶‑9‑酰氯；（2）合成9,10‑二氢化吖啶‑9‑酰氯；（3）合成10‑甲基‑9,10‑二氢化吖啶‑9‑酰氯；（4）合成10‑甲基‑9,10‑二氢化吖啶‑9‑硫代羧酸‑3’‑乙氧苯酯；（5）合成9‑（3’‑乙氧苯基硫代磷酸氧亚甲基）‑10‑甲基‑9,10‑二氢化吖啶二（氰乙基）酯。本发明的制备方法工艺简单，稳定性好，价格便宜。

技术领域

本发明涉及一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备工艺，属于化学发光免疫分析的技术领域。

技术背景

化学发光酶疫分析包含了免疫化学反应和化学发光反应两个部分。免疫分析系统是将酶标记在抗原或抗体上，经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应结束后，加入酶的发光底物，化学发光物质经酶催化后，形成一个处于激发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测。待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。

碱性磷酸酶在化学发光酶疫分析应用比较广泛，目前使用最多的发光底物是1，2－二氧环己烷，主要是AMPPD及其衍生物。此类物质大多为国外专利产品，价格昂贵、不易购买。

碱性磷酸酶能催化二氢吖啶磷酸酯类化合物反应并产生化学发光，此种反应速度快，发光到达平台期时间短，已经用于碱性磷酸酶的活性检测和碱性磷酸酶酶联免疫反应检测。

中国专利CN104761584A、CN104418887A和CN1312252A公开了几种二氢吖啶磷酸酯类化合物的合成方法。但是合成工艺较为复杂，合成物质稳定性较差。

本发明提供了一种的新化合物的制备方法，该化合物制备工艺较简单，稳定性好，价格便宜。

发明内容

本发明公开了一种与碱性磷酸酶反应产生化学发光的化合物的制备方法。其中，该化合物结构式如下：

，该化合物的NMR图如图2所示。

该化合物的制备方法包括以下步骤（如图1所示）：

（1）合成吖啶-9-酰氯：将吖啶-9-羧酸溶于三氯甲烷中，加入4-二甲氨基吡啶，缓慢滴加亚硫酰氯，并回流该反应混合物，减压除去溶剂得到黄色固体。

（2）合成9,10-二氢化吖啶-9-酰氯：将吖啶-9-酰氯悬浮于甲醇中，分别先后加入氯化铵和锌到该溶液中，回流反应该反应混合物，过滤该溶液并用甲醇洗涤该沉淀，蒸发干燥得到产物9,10-二氢化吖啶-9-酰氯。

（3）合成10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-酰氯：将9,10-二氢化吖啶-9-酰氯溶于甲苯溶液中，冰浴控温，加入碳酸二甲酯和碳酸铯，搅拌反应，升温至室温，搅拌反应，蒸发干燥除去溶剂，加入乙酸乙酯做萃取剂，减压除去萃取剂得到产物10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-酰氯。

（4）合成10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯：将制备好的10-甲基-9,10-二氢化吖啶-9-酰氯溶于三氯甲烷中，分别加入3-乙氧基苯硫酚和4-二甲氨基吡啶，冰浴控温0～10℃，搅拌反应，然后撤去冰浴，室温再反应，干燥蒸发得到产10-甲 基-9,10-二氢化吖啶-9-硫代羧酸-3’-乙氧苯酯。