[发明专利]芋头茎尖组织培养中外植体消毒培养的方法及植物植株

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中植物组织培养技术领域，具体而言，涉及芋头茎尖组织培养中外植体消毒培养的方法及植物植株。

背景技术

芋[Colocasia esculenta(L.)Schott]，是一种重要的蔬菜和药用植物,在我国具有悠久的栽培历史。芋还是迄今发现的耐盐性最强的蔬菜类作物之一,长期栽培可以降低土壤的盐渍化程度,对滩涂的开发和利用具有较大的应用价值。

全球芋头种植面积最大的是非洲，非洲芋头种植的面积占全球芋头种植总面积的79.9％；而亚洲种植面积占全球芋头种植总面积的7.6％，主要种植地点集中在中国、日本、菲律宾、泰国等。中国的槟榔芋产区主要分布在广西、广东、海南、福建，湖北、浙江、山东、四川、江西等地，并以多子芋为主，著名品种有广西荔浦芋、福建福鼎芋、广东乐昌炮弹芋、靖江香沙芋等。

近几年，由于种植结构调整和人们对芋头产品的青睐，芋头种植面积大幅度提高，出现供需两旺的势头。芋头是无性繁殖作物，以球茎作为生产用种，农户常年留种种植，连续栽培易引起病理性和生理性退化。芋头退化是由病毒侵染并在芋块内累代积留引起的，表现为产量和品质的明显降低。大部分病毒不能侵染芋头茎尖组织，因而通过茎尖组织培养脱毒种芋，将脱毒种芋应用于生产是防止芋头退化的有效措施。在植物组织培养过程中对植物外植体消毒灭菌的效果是植物组织培养成功的关键。污染是造成组织培养失败的主要原因之一，很多学者在初代培养阶段，很难得到无菌苗；或者虽然在初代培养得到了无菌苗，但在继代培养时往往出现大量污染甚至全部污染。

如何降低成本是提高经济效益的首要问题，因此,组织培养中降低污染率是工厂化生产中不可忽视的技术环节。在植物组织培养过程中,存在两种类型的污染：一类是通常所说的污染，即外植体消毒不彻底,无菌操作和培养过程中而导致的污染；另一类是包括真菌和细菌的内源菌污染，这也是造成内源污染的主要原因。外植体污染是组织培养中众多污染途径中最难解决的一个。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种芋头茎尖组织培养中外植体消毒培养的方法，所述方法中，通过在培育过程中，对外植体采用适宜的方法进行消毒，从而能够有效避免茎尖组织培养中外植体受到污染，同时还能够保证较高的分生组织诱导率。

本发明的第二目的在于提供一种植物植株，所述植株由本发明方法培育得到。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种芋头茎尖组织培养中外植体消毒方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将从采集的母芋上选取的子芋浸泡于杀菌剂溶液中消毒后，埋于砂床中催芽；

(2)待发出的芽体长至15～20cm后，将子芋从沙盘中取出，并在清洗和除去子芋外皮后，晾干备用；

(3)以酒精擦洗子芋和芽体，然后去除茎尖周围的叶片和组织，并截取2～3cm的芽体；

将截取的芽体依次用酒精和二氯化汞溶液消毒，然后清洗并干燥；

(4)剥除干燥后的芽体上生长点外围包裹的叶片；选取生长点上部的组织，并诱导培养。

可选的，本发明中，步骤(1)中所选取的子芋的质量为35～70g。

可选的，本发明中，所述杀菌剂溶液为50％多菌灵可湿性粉剂300～500倍液。

可选的，本发明中，步骤(1)中所述浸泡的时间为15～30min。

可选的，本发明中，步骤(1)中还进一步包括每隔3～5日浇水，并保持沙盘湿润的步骤。

可选的，本发明中，步骤(3)中所述以酒精擦洗子芋和芽体，是以浓度为75～80％的酒精擦洗子芋和芽体。

可选的，本发明中，步骤(3)中所述依次用酒精和二氯化汞溶液消毒，是以浓度为60～70％的酒精消毒2～3min后，再以二氯化汞溶液消毒6～10min。

可选的，本发明中，所述二氯化汞溶液为溶有吐温20的浓度为0.1～0.3％的二氯化汞溶液。

可选的，本发明中，所述诱导培养所用培养基为添加有BA、NAA以及2～3％蔗糖的基础MS培养基；

其中，BA的浓度为2～3mg/L，NAA的浓度为0.1～0.2mg/L。

同时，本发明还提供了由本发明所述方法培养得到的芋头植株。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：