[发明专利]一种高硫酸化硫酸角质素及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种高硫酸化硫酸角质素，其特征在于：所述高硫酸化硫酸角质素来源于鲨鱼软骨，分子量为20～100kDa，所述高硫酸化硫酸角质素由6位硫酸化半乳糖和6位硫酸化乙酰氨基葡萄糖以β-1,3和β-1,4糖苷键交替连接而成，其二硫酸化二糖含量为80～95％，非还原端为唾液酸化的三硫酸基取代硫酸角质素四糖，唾液酸与半乳糖之间为α-2,3连接，其结构式如下：

其中所述结构式中R₁＝SO₃^-，R₂＝H或R₁＝H，R₂＝SO₃^-；

所述唾液酸化的三硫酸基取代KS四糖，其结构如下所示：

其中所述结构式中两个取代基R₁和R₂其中之一为SO₃^-，另一取代基则为H。

2.根据权利要求1所述的高硫酸化硫酸角质素，其特征在于：所述鲨鱼软骨为鲨鱼的关节、肋骨、头骨、椎骨、椎间盘或气管部位的软骨。

3.权利要求1所述的高硫酸化硫酸角质素的制备方法，其特征在于它包括以下步骤：

(1)蛋白酶降解：将鲨鱼软骨粉碎后分散于酶解缓冲液中，然后加入木瓜蛋白酶，50～70℃摇床反应，后煮沸使酶灭活；降温后再加入胰蛋白酶，30～55℃摇床反应，后煮沸使酶灭活，冷却后离心去除不溶性杂质；

(2)乙醇沉淀：向步骤(1)得到的溶液中加入乙醇，低温放置12～24小时，离心后取沉淀，沉淀用蒸馏水复溶后透析，减压浓缩、冻干后得到鲨鱼软骨粘多糖组分；

(3)阴离子交换树脂分离：将步骤(2)所得鲨鱼软骨粘多糖组分用蒸馏水溶解，以氯化钠水溶液为流动相线性洗脱，经阴离子交换树脂分离纯化，硫酸苯酚法检测，蒸馏水透析后减压浓缩、冻干，得到高纯度硫酸角质素；

或者软骨素酶解分离：将步骤(2)所得鲨鱼软骨粘多糖组分用缓冲液溶解，加入软骨素ABC酶，25～40℃摇床反应4～6h后煮沸使酶灭活，离心后向上清液中加入乙醇，低温放置12～24小时，离心收集沉淀，复溶于水后透析脱盐、冻干，得到高纯度硫酸角质素；

所述步骤(3)中所述阴离子交换树脂的填料为Q-Sepharose FF、DEAE-Sepharose FF、Capto-Q Sepharose FF、DEAE-Cellulose或Capto-DEAE Sepharose FF；

所述步骤(3)中软骨素ABC酶的用量为300～600mU·g^-1。

4.根据权利要求3所述的高硫酸化硫酸角质素的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中木瓜蛋白酶的用量为10～100U·g^-1，pH为7.0；所述胰蛋白酶的用量为0.1～10％，pH为7.5。

5.根据权利要求3所述的高硫酸化硫酸角质素的制备方法，其特征在于：所述步骤(1)中加入木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的反应时间均为8～12h。

6.权利要求1或2所述的高硫酸化硫酸角质素在制备调节肠道微生物的制剂中的应用。

7.权利要求1或2所述的高硫酸化硫酸角质素在制备增强免疫力的制剂中的应用。