[发明专利]高效价粗品肝素钠的制备方法及其生产装置

说明书

本发明属于生物技术领域领域，具体涉及一种高效价粗品肝素钠的制备方法及其生产装置。本发明提供了一种用于制备粗品肝素钠的试剂组合物，所述试剂组合物包括以下试剂：低盐洗涤试剂A：质量体积百分比为2～5％的氯化钠水溶液；中盐洗涤试剂B：质量体积百分比为3～6％的氯化钠溶液；高盐洗涤试剂C：质量体积百分比为4～7％的氯化钠水溶液；洗脱试剂D：质量体积百分比为8～20％的氯化钠水溶液；沉淀试剂E：20～40°的肝素钠乙醇水溶液。本发明利用不同盐度的洗涤试剂进行梯度洗涤，结合低盐度洗脱和低乙醇度沉淀的制备方法制备的粗品肝素钠杂质低、肝素钠分子结构保存完整，生物活性接近或达到肝素钠注射级水平。

技术领域

本发明属于生物技术领域领域，具体涉及一种高效价粗品肝素钠的制备方法及其生产装置。

背景技术

肝素钠(Heparin Sodium)肝素钠是粘多糖硫酸酯类抗凝血药。肝素钠是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质。在动物体内多以肝素钠-蛋白质复合物的形式存在。医学上，肝素钠在体内外均有抗凝血作用，可延长凝血时间、凝血酶原时间和凝血酶时间，常用于输血时预防血液凝固及血库保存鲜血等体外抗凝剂。临床上具有抗凝血、降血脂、保护内皮细胞、抗血小板积聚和释放、促纤溶、抑制动脉平滑肌细胞增殖、降低血液粘度、降血脂和抗炎等作用，可用于治疗各种疾病并发的播散性血管内凝血早期，预防动、静脉血栓和肺栓塞，治疗动、静脉血栓和肺栓塞，缺血性脑卒中，不稳定型心绞痛(减轻症状、预防心肌梗塞)，急性心肌梗塞(防止早期再梗塞和梗塞区延展，降低病死率)；在人工心肺、腹膜透析或血液透析时作为抗凝血药物。

目前提取粗品肝素钠的方法有很多种，普通常用的主要有盐解法、酶解法等。常规提取工艺首先将猪粘膜或初级肝素钠水溶解，经氯化钠或酶解离，大孔阴离子树脂吸附，洗脱，乙醇沉淀、脱水得粗品肝素钠。常规生产方法使用饱和盐水造成盐的大量浪费和环境污染，而且得到的肝素钠粗品含大量蛋白核酸杂，硫酸皮肤素和硫酸软骨素等有机杂质，生物活性低。

因此需要开发一种新的肝素钠制备工艺来制备低杂质、高效价的肝素钠粗品。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物及用所述试剂组合物制备粗品肝素钠的方法，本发明的方法制备的肝素钠粗品杂质低、生物活性接近到达肝素钠注射剂生物活性，使肝素钠注射级的生产变得极其容易。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

用于提高粗品肝素钠纯度的试剂组合物，包括以下试剂：

试剂A：质量体积百分比为2～5％的氯化钠水溶液；

试剂B：质量体积百分比为3～6％的氯化钠水溶液；

试剂C：质量体积百分比为4～7％的氯化钠水溶液；

试剂D：质量体积百分比为8～20％的氯化钠水溶液；

试剂E：乙醇肝素钠水溶液，所述乙醇肝素钠水溶液中乙醇的浓度为20～40°。

所述试剂组合物能有效去除杂质、提高肝素钠的活性；所得粗品肝素钠抗IIa活性效价接近或达到肝素钠精品要求，极大方便肝素钠生产的质量控制。

猪粘膜可以通过生猪屠宰厂采购猪小肠，然后采用自动肠衣清洗生产线获得，一般来说1根猪小肠生产约1～1.5公斤粘膜。

初级肝素钠可以是市售常规生产工艺生产的含有大量杂质活性低的肝素钠粗品。

本发明的目的之二在于提供一种用所述试剂组合物制备粗品肝素钠的方法，具体包括以下步骤：

1)溶解：将猪粘膜置于水介质中混溶，加入氯化钠，至其全部溶解得溶液；

2)酶解：在步骤1)所述溶液中加入蛋白酶进行酶解，灭活后得酶解液；