[发明专利]PEDF在制备治疗糖尿病骨组织并发症药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及PEDF在制备治疗糖尿病骨组织并发症药物中的应用。

背景技术

糖尿病不仅引起包括糖，脂肪，蛋白质三大营养物质的异常，还涉及电解质，骨矿物质等代谢紊乱。因此糖尿病引起的并发症是目前面临的最大问题，例如患者伤口长期不愈合，等症状。骨组织也是受糖尿病并发症影响比较大的一个组织，已经有研究表明，糖尿病人由于钙沉积浓度的下降，极易导致骨质疏松症，另外病人骨折后不易愈合。有报道称糖尿病人在发育期的骨形成和累积量较正常人低，而且之后再骨吸收方面出现障碍，容易出现骨质疏松的症状。在动物的糖尿病研究模型中，也发现钙沉积水平，骨矿物质含量以及骨钙素的表达水平明显下降。

坏疽问题也是让糖尿病患者痛不欲生的并发症，导致了糖尿病人截肢的概率较正常病人截肢的概率高。引起坏疽问题的主要因素就是血糖高，血糖高的情况下就会引发机体的血管病变，神经病变，白细胞改变等问题。骨组织是血管丰富的组织，VEGF是血管内皮生长因子，对血管生成有促进作用。用抗体VEGFR1和VEGFR2阻抑VEGF-A的活性，会显著降低骨组织的形成，血管数量明显降低。血管数量的增加会促进成骨祖细胞的成熟，增加骨组织的形成。同时通过激发血管信号也可能会加速成骨过程。

因此，通过上调糖尿病病人骨组织VEGF表达水平，以及促进糖尿病病人骨钙沉积将有效缓解糖尿病并发症。

发明内容

本发明的目的是本发明的目的是为了解决糖尿病并发症引发骨组织出现问题，包括骨质疏松、骨伤愈合困难、坏疽等，而提供一种上调成骨细胞VEGF表达和OCN和Runx2基因表达，从而改善糖尿病病人骨质疏松、促进骨伤愈合和缓解坏疽的药物PEDF。

PEDF在促进成骨细胞的VEGF表达的用途。

PEDF在提高成骨细胞OCN和Runx2基因表达的用途。

PEDF在制备糖尿病骨组织并发症药物中的应用。

所述的骨组织并发症为骨质疏松、骨伤愈合困难或骨组织病变引起的坏疽。

本发明提供了PEDF在制备治疗糖尿病骨组织并发症药物中的应用，糖尿病并发症引发骨组织出现问题，包括骨质疏松，骨愈合困难，坏疽等。经实验表明，PEDF可影响间充质干细胞成骨分化的效率以及钙沉积水平。外源的PEDF会加速间充质细胞的成骨分化进程，提高钙沉积水平。成骨细胞来源于间充质干细胞，比较糖尿病人与非糖尿病人成骨细胞PEDF的表达水平及成骨分化能力后发现，非糖尿病人的PEDF表达水平高，而且成骨分化能力，效率以及钙沉积水平都比糖尿病人高（p<0.01）。外源PEDF可以上调糖尿病人成骨分化相关基因OCN，Runx2的表达。比较两组病人成骨细胞的VEGF表达水平发现，非糖尿病人整体的VEGF水平比糖尿病人的VEGF水平高，外源的PEDF可以上调VEGF的表达。PEDF可以提高糖尿病人成骨细胞分化能力，钙沉积水平。可以应用到治疗糖尿病并发症引起的骨组织相关疾病。

附图说明

图1 分离成骨细胞培养结果；

图2 PEDF上调成骨细胞VEGF的表达结果；

图3 PEDF上调OCN和Runx2基因表达结果；

图4 PEDF促进糖尿病病人成骨细胞钙沉积结果。

具体实施方式

实施例1 成骨细胞的的分离及培养

收集足截肢病人的骨废弃物样本，分成糖尿病人组和非糖尿病人组。组织样本由宾州州立大学赫尔希医学院提供。将收集到的组织样本用PBS润洗3次后，去掉骨组织表面的结缔组织以及脂肪组织，并用酒精处理细胞15s（去除骨组织表面的成纤维细胞）。用浓度为4mg/ml的胶原酶消化骨组织，每45min收集一次消化液上清，1000rpm离心5min，留沉淀，连续操作三次，第四次消化细胞45min后，离心收集骨组织和单细胞沉淀。将他们均匀铺到100mm细胞培养皿中培养。培养液成分为a-MEM，10%FBS，1%双抗，37°，5% CO₂培养箱中培养7天后，弃去骨组织，更换新鲜培养液。培养后的成骨细胞倒置显微镜下观察生长良好，如图1所示。

实施例2 PEDF上调糖尿病人成骨细胞VEGF的水平