[发明专利]快速获取马尾松无性繁殖造林育苗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种种子萌发及育苗的方法领域，更具体地说，本发明涉及一种快速获取马尾松无性繁殖造林育苗的方法。

背景技术

马尾松是我国南方最重要的荒山绿化造林树种之一，在我国分布范围极为广阔。其经济价值高，用途广，是工农业生产上的重要用材，不仅可用来生产三板、造纸及化纤工业制造，还可用来生产松香、松节油等工业原料。木材极耐水湿，有“水中千年松”之说，特别适用于水下工程。马尾松研究从上世纪80年代开始，经过几十年的发展，选育了大量的优良无性系，并通过建立马尾松初级种子园，生产了大量马尾松良种。但是完成建园时间要2～4年时间，林地管理要2年时间，成本高。而通过嫁接苗的方法直接上山种植，一定程度能降低成本，但成活率低，达50％以上，给建园带来很大困难。

马尾松的无性繁殖难度较大，其中组织培养更加困难。但由于植物的组织培养具有繁殖系数大、苗木生长整齐等优点，攻克其组织培养技术意义重大。传统的无菌培养多采用琼脂粉(条)培养基，需要经过琼脂粉(条)加热溶解、杀菌和冷却凝结三个步骤，操作较为繁琐；另外，无菌培养由于存在种子发芽率和污染等多种问题，无菌苗的成苗率在20％以下，使80％以上的培养基成为废弃物难以回收再利用而造成浪费。

马尾松是组织培养生根较为困难的树种。以初代培养的马尾松丛生芽生根生根率较为理想，但经继代培养后，其生根率明显下降。吴小芹等(2009)和季孔庶等(2010)将经过丛芽诱导和伸长的初代培养后单芽直接进行生根，其生根率分别为85％和92.5％；而薛鹰(2006)在经过继代培养以后取单芽生根，其生根率仅为26.7％。要实现马尾松组培苗工厂化生产，必须突破继代芽生根困难瓶颈因素。

如何快速、低成本、高成活率地获得马尾松造林育苗是当前亟待解决的重要问题。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种操作简便、成本低廉和成活率高的快速获取马尾松无性繁殖造林育苗的方法，为其荒山绿化造林提供良好的技术基础。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种快速获取马尾松无繁性殖造林育苗的方法，包括以下步骤：

1)种子萌发

A、制作棉花培养基

将棉花用清水洗净，拧干后放置于溶液a中浸泡30min，其中所述溶液a由1L水中加入7g魔芋粉和25g蔗糖混合而成，然后将浸泡好的棉花放入培养瓶中，并将培养瓶置于冰箱中冰冻30min；再将无纺布洗净，并浸泡于水中，10min后将无纺布覆盖在培养瓶中棉花的上表面，拧紧瓶盖，放入灭菌锅内灭菌，灭菌条件为115℃，30min，备用，其中，所述无纺布上设置有彼此均匀间隔的孔径为1cm的圆孔，相邻两个圆孔间距为0.4cm；

B、消毒处理

首先将马尾松种子置于质量分数为0.4％的硫酸铜溶液中，超声波处理；然后依次用质量分数为75％酒精淋洗1min，质量分数为0.05％HgCl₂溶液淋洗10min；最后用质量分数为3％NaClO溶液浸泡20min，并用清水冲洗干净，备用；

在培养室中将消毒处理好的马尾松种子接种到棉花培养基中，每个无纺布的圆孔接种1粒种子，进行种子萌发，得到马尾松无菌芽Z；

2)切下长度为4～6cm的马尾松无菌芽Z的顶芽，作为外植体，置于培养基b中进行培养，得到马尾松丛生芽；其中所述培养基b由每1LMS培养基中加入3mg 6-BA、0.2mg NAA、50g马铃薯和20g蔗糖混合而成；

3)切下伸长至4～6cm长的马尾松丛生芽的顶芽或者嫩茎，种植于培养基c中进行伸长培养后，得伸长芽；切下长度4～6cm的伸长芽的顶芽或者嫩茎接种到培养基d中进行增殖，获得继代芽；

其中所述培养基c由每1LMS培养基中加入20mg荧光粉、0.5mg NAA、3000mg蔗糖和7000mg琼脂混合而成；所述培养基d由每1LMS培养基中加入20mg荧光粉、1mg 2，4-D、1mg 6-BA、1mg KT、0.3mg NAA、3g蔗糖和7g琼脂混合而成；

4)切下生长健壮、高3～4cm的继代芽，用液体培养基e浸泡25～35min，取出后用液体培养基f浸泡15～25min，移植于育苗器中，荧光照射处理，获得马尾松无性繁殖苗；

其中所述液体培养基e由每1LDCR培养基中加入75mgIBA和30mgNAA混合而成；液体培养基f由每1LGD培养基中加入0.4mgABT6和5g滑石粉混合而成；