[发明专利]菌根真菌在石斛栽培中的应用

说明书

本发明公开了一种菌根真菌在石斛栽培中的应用技术，所用的小菇属4种真菌分别为石斛小菇(Mycena dendrobii)，紫萁小菇(Mycen osmundicola)，兰小菇(Mycena orchidicola)，开唇兰小菇(Mycena anoectochila)；先分别培养菌根真菌和石斛苗，再将菌根真菌与石斛苗共生栽培。采用该项新技术，可大大缩短石斛的生长周期；提高石斛产量和有效成分含量。该项技术栽培方法简单、投资少、不施任何肥料和农药，生产出的石斛为绿色产品。

技术领域

本发明涉及一种石斛菌根栽培技术，具体地说涉及一种菌根真菌在石斛栽培中的应用技术，它包括本发明所用的菌根真菌、菌根真菌的培养、石斛由原球茎发育至苗及其继代培养、菌根真菌在石斛栽培中的应用技术和对石斛的促生长效果及对有效成分含量的影响。

背景技术

中华人民共和国药典所收载的石斛为铁皮石斛(Dendrobium candidum)和金钗石斛(D.nobile)，现商品通称石斛。石斛为我国兰科(Orchidacea)传统的名贵药用植物，具有益胃生津、滋阴清热等功效。多年来，由于产区药农的过度采挖，使得这两种植物的自然资源遭到严重破坏，并濒临灭绝，均已被列为国家重点保护的珍稀濒危物种。由于石斛植物种子细小，萌发困难，同时无性繁殖系数低，加上特殊的生活环境，给此类药材大面积栽培带来很大困难。虽然科学工作者及药农采取了组织培养及人工栽培等方法繁殖铁皮石斛和金钗石斛，但组培无菌苗移入自然条件下成活率低、易染杂菌，而人工栽培生长缓慢，难以从根本上解决它们的繁殖困难问题，无法提供大量产品供药用。根据兰科植物与真菌形成菌根结构的特点，我们自1987年开始从事自养型兰科药用植物菌根真菌的分离、培养及其利用菌根真菌在石斛、白芨等药用植物种子萌发方面的研究，并取得了较好效果，自1992年以来对兰科菌根真菌在石斛等兰科药用植物苗生长中进行了应用，我们从野生的铁皮石斛和金钗石斛根中已经分离获得多种内生真菌，并对石斛种子萌发与内生真菌的关系进行了研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种菌根真菌在石斛栽培中的应用技术，可以解决石斛繁殖及成活率低、栽培生长缓慢和周期长、有效成分含量低和药效差等问题。

为实现上述目的，本发明采用的技术是先分别培养菌根真菌和石斛苗，再将菌根真菌与石斛苗共生栽培。能够完成本发明的菌根真菌是一种小菇属(Mycena)真菌，具体为：石斛小菇(Mycena dendrobii)，紫萁小菇(Mycena osmundicola)，兰小菇(Mycenaorchidicola)，开唇兰小菇(Mycena anoectochila)等4种。上述4种真菌分别可从铁皮石斛、天麻、墨兰和花叶开唇兰获得，这4种真菌于2002年1月14日在中国微生物菌种保藏管理委员会保藏，保藏编号为0685、0689、0688和0687。

具体地说，本发明所述技术地步骤方法如下(除有特殊说明外，本发明中所述的比例均为重量百分比)：

1、菌根真菌的培养

将上述的菌根真菌自低温保藏的斜面试管菌种活化后，分别转接于PDA平皿中，于25℃恒温培养12d，分别在菌落边缘打孔成菌片，并以小碎块接入液体或固体培养基；菌根真菌的液体培养为：

培养基的配制：葡萄糖2.5％；KH₂PO₄ 0.15％；K₂HPO₄ 0.1％；MgSO₄0.15％；天然物：麦麸3％(煮汁)。高压灭菌后分别接入上述真菌。培养条件：培养基pH5.6；三角瓶摇床培养瓶装量50％；转速120转/分钟；20℃培养35天收获。发酵罐培养接种量10％，其余参数同上。发酵培养结束时收获发酵物，用匀浆机打碎菌体及发酵物备用。

菌根真菌的固体培养为：