[发明专利]牛传染性鼻气管炎病毒JSM株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程和免疫领域，特别是涉及牛传染性鼻气管炎病毒株JSM及其应用，属于兽用生物制品领域。

背景技术

牛传染性鼻气管炎(Infectious bovine rhinotracheitis，IBR)是由Ⅰ型牛疱疹病毒(BHV-1)引起的牛的一种急性、热性、接触性传染病，临床表现为上呼吸道及气管黏膜发炎、呼吸困难、流涕等症状，还可引起脓疱性外阴道炎、龟头炎、结膜炎、幼牛脑膜炎、乳房炎、流产等。该病于二十世纪50年代初最早见于美国，目前世界范围内流行。我国于1980年首次从新西兰进口种牛中发现此病，目前在大部分省份的奶牛、黄牛和水牛均有IBRV感染，造成较大的经济损失，疫苗是防控该病的主要措施之一。

牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea，BVD)是由牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)引起的以发热、黏膜糜烂溃疡、白细胞减少、腹泻、咳嗽及怀孕母牛流产或产出畸形胎儿为主要特征的一种传染病。牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)属于黄病毒科(Flaviviridae)，瘟病毒属(Pestivirus)。基因组为单股正链RNA，由一个开放阅读框(ORF)和5’UTR及3’UTR组成。1946年Olafson等首次发现并分离出BVDV,目前，该病在世界上广泛存在。李佑民等于1983年首次从流产胎儿的脾脏中分离到了BVDV，证明该病已在我国存在。近年来从我国多个发病牛场分离到了BVDV，给我国养牛业带来巨大的经济损失。对我国部分省份的牛血清样品进行检测，结果表明，该病在我国呈上升态势。

在临床病例研究中发现，BVDV和IBRV往往混合感染。因此本领域迫切需要开发一种能够同时安全、有效抵抗BVDV和IBRV的疫苗制剂。

发明内容

为了获得安全性好、免疫力高、无免疫干扰的牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻二联活疫苗组合物，达到同时预防IBR和BVD的目的。本发明首先公开了一株牛传染性鼻气管炎病毒株，该毒株命名为IBRV JSM株，并于2016年8月24日在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，其保藏号是：CGMCC NO.12666。

该病毒是由IBRV病毒在细胞连续传代弱化而来。具体来说，本发明人从疑似发病牛鼻拭子中分离得到IBRV病毒，并将其接种MDBK细胞连续传代培养，经细胞亚克隆筛选和病毒的克隆纯化100代获得。本发明人将其命名为IBRV JSM株，其病毒含量可达10^8.5TCID₅₀。

本发明同时保护这一IBRV JSM株在制备预防由牛传染性鼻气管炎病毒引起的疾病的药物中的应用。

同时，本发明公开了一种疫苗，该疫苗中含有前述的牛传染性鼻气管炎病毒株。

并且在本发明中我们进一步要求保护含有前述牛传染性鼻气管炎病毒株的疫苗或与其他病原体的疫苗组分共同组成的多联疫苗，特别是与其他病原体的疫苗组分共同组成的二联疫苗。

作为一种优选，在本发明中我们特别的公开了牛传染性鼻气管炎病毒与牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型组成的二联疫苗。

其中，牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型优选为本发明人新获得牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型NMM株(BVDVⅠ型NMM株)，该病毒于2016年8月24日在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，其保藏号是：CGMCC NO.12664。

该病毒是由BVDVⅠ型病毒传代弱化而来。具体来说，本发明人从疑似感染牛血液中分离得到BVDVⅠ型病毒。并将其接种MDBK细胞连续传代培养，经细胞亚克隆筛选和病毒的克隆纯化80代获得，本发明人将其命名为BVDVⅠ型NMM株，其病毒含量可达10^6.5TCID₅₀以上。

进一步地，我们还保护这一牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型在制备预防由牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型引起的疾病的药物中的应用，其中所述的药物为疫苗。

最后，在本发明中我们还公开了以牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型NMM株与牛传染性鼻气管炎病毒JSM株制备牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻二联活疫苗的方法，包括以下步骤：

a)将牛病毒性腹泻病毒Ⅰ型NMM株与牛传染性鼻气管炎病毒JSM株分别进行培养，收获病毒液；

b)将两种病毒液混合；

c)向混合病毒液中加入冻干保护剂，冷冻真空干燥，得到二联活疫苗。

关于这一制备方法，我们进一步将其细化描述为，包括以下步骤：