[发明专利]一种抑制根结线虫卵孵化的天然物质的提取工艺

说明书

技术领域

本发明涉及抑制蔬菜作物根结线虫卵孵化的天然物质，特别是一种从大葱根系分泌物中提取出的抑制根结线虫卵的天然物质，属于蔬菜作物生物绿色防治技术领域。

背景技术

根结线虫是危害农作物的重要病原生物之一，它广泛分布于世界各地，主要寄生在蔬菜、粮食作物、经济作物、果树、观赏植物及杂草等2000多种寄主上。目前我国报道的根结线虫有29种，引起农作物损失的90％以上是由南方根结线虫、花生根结线虫、爪哇根结线虫及北方根结线虫等4个主要种引起的。植物被根结线虫侵染后，可造成根系的衰弱、畸形或腐烂，致使植物地上部分的茎和叶发育不良，甚至枯死。根结线虫除了能直接对作物造成损害外，还能使真菌和细菌病害适于发生，是发生植物病害的一个重要诱因。植物在根结线虫病害发生后一般减产10～20％，严重的达75％以上，已成为我国蔬菜主要土壤病害。

目前国内外对根结线虫的防治以化学药剂防治为主，主要使用人工合成的杀线虫剂，但无论是熏蒸性还是非熏蒸性药剂，不仅成本高，而且对植物病原线虫的毒杀作用都是非特异性的。另外，这些杀线虫剂的毒性较高、环境相容性差，极易造成对人及其他非靶标生物的危害，并严重污染环境，因此各国都在逐渐地限制使用这些化学药剂。

植物根系能够感知根际中微生物的存在，并通过根尖分泌一系列物质，诱导菌群繁殖，改变微生物的种类和数量，抑制致病菌的生长。近年来，在全球可持续发展战略全面实施和建设环境友好型社会的背景下，根结线虫的生物防治研究成为生命科学领域内一大热点。人们从植物体内的次生物质中寻找能抑制根结线虫的成分并进行直接或间接的利用，至今已有40多科，近100种植物被报道有杀线虫活性。报道的具有杀线虫活性的植物化合物也有10几类，100余个，主要是多联噻吩类、多炔类、异硫氰酸盐类、生物碱类、脂肪酸及其衍生物类、萜类及酚类等化合物。

我们经多年试验证实，大葱与黄瓜伴生栽培能显著减轻其根结线虫病的发生，同时显著降低其它根部病害的发生，并对其作用机理进行了深入研究。大葱根系分泌物中防治根结线虫发挥主要作物的物质在国内尚无报道。

发明内容

本发明旨在深入研究大葱伴生栽培对黄瓜根结线虫病害防治及作用机理，自行研制出一套模拟仿生大葱根系分泌物提取装置，并通过该装置对大葱根系分泌物进行科学有效的提取和分离，最终获得了一种能够抑制根结线虫卵孵化的天然物质。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：

一种抑制根结线虫卵孵化的天然物质的提取工艺，其特殊之处在于，包括以下提取步骤：

步骤一：水培法葱根系分泌物的收集

将大葱根系彻底清洗并去掉所有杂质，之后用超纯水清洗干净，放入专用的水培法葱根系分泌物收集装置内，培养期为50-60天；培养结束后，称量大葱根系鲜重，将含有大葱根系分泌物的营养液进行收集，并将其减压浓缩至2.0-2.5g.ml^-1；

所述水培法葱根系分泌物收集装置主要由培养箱、连接于所述培养箱内并对其提供输氧充气的充气输氧器构成，其中所述的培养箱为矩形的箱体结构，由箱体和箱盖构成，所述箱体内部盛放有营养液，所述箱盖上预留定位通孔，所述定位通孔便于大葱穿过并对大葱上部起到固定作用，在所述培养箱的底部铺设有浸没于所述营养液内的陶粒，所述培养箱中的陶粒铺设量占所述营养液体积的30-40％；

所述陶粒的预处理过程包括：首先用自来水充分刷洗干净，完全去掉表面的杂质，然后用超纯水浸泡10-12小时，晾干待用；

所述营养液是由色谱纯级别药品和超纯水配制而成，具体配方为(mmol/L)：K₂SO₄0.75，MgSO₄ 0.65，KCl 0.1，Ca(NO₃)₂ 2.0，KH₂PO₄ 0.25，EDTA-Fe 0.1，H₃BO₃ 1×10^-2，(NH₄)₆Mo₇O₂₄ 5×10^-6，MnSO₄ 1×10^-2，CuSO₄ 1×10^-4，ZnSO₄ 1×10^-3。

步骤二：大葱根系分泌物的萃取分离