[发明专利]源于肠道病毒71型的新型病毒样颗粒及其应用

说明书

本发明提供了一种源于肠道病毒71型的新型病毒样颗粒及其应用。具体的，本发明将肠道病毒71型VP4蛋白截短后，仍能够获得肠道病毒71型的新型病毒样颗粒，且该病毒样颗粒的表达量高、免疫原性强、并显示了良好的特异性。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体地说，本发明涉及源于肠道病毒71型的新型病毒样颗粒及其应用

背景技术

肠道病毒71型(Enterovirus 71，EV71)是小RNA病毒科肠道病毒属的成员之一，是无包膜的单正链RNA病毒。成熟EV71病毒的衣壳由60个拷贝的VP1、VP2、VP3和VP4组成。

EV71是引起手足口病的最主要病原体。虽然EV71感染通常表现为轻微的自限性疾病，但也可能导致严重的神经系统并发症，如脑干脑炎、脊髓灰质炎样瘫痪和肺水肿等症状，甚至是死亡。EV71病毒样颗粒(virus-like particles，VLPs)作为一种候选疫苗，已经在昆虫细胞表达系统和酵母表达系统中表达出来，大量临床前试验都证实了其可以在动物模型上诱导中和性抗体产生，并能提供保护来抵抗致死剂量的病毒感染。

为了尽快的将EV71病毒样颗粒推向临床应用，本领域技术人员致力于降低EV71病毒样颗粒的制备成本，以及降低EV71病毒样颗粒的临床应用风险。

发明内容

本发明的目的在于提供一种源于肠道病毒71型的新型病毒样颗粒及其应用。

本发明的第一方面，提供了一种肠道病毒71型病毒样颗粒，所述病毒样颗粒包括截短的VP4蛋白，与对应的野生型VP4蛋白相比，所述截短的VP4蛋白中至少截掉了野生型VP4蛋白的第X位至第Y位氨基酸残基，其中，X为1～8之间的正整数，Y为10～69之间的正整数。

在另一优选例中，X为1～8之间的正整数,如1、2、3、4、5、6、7、或8。

在另一优选例中，Y为15～55之间的正整数。

在另一优选例中，Y为15～50之间的正整数。

在另一优选例中，Y为20～45之间的正整数，如20、25、30、35、或40。

在另一优选例中，所述X为1。

在另一优选例中，所述Y为20、40或69。

在另一优选例中，所述野生型VP4蛋白的氨基酸残基编号依据SEQ ID NO.4。

本发明的第二方面，提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸包括编码本发明第一方面所述的病毒样颗粒的外壳蛋白的多核苷酸序列。

在另一优选例中，所述多核苷酸序列包括编码所述截短的VP4蛋白的多核苷酸序列。

在另一优选例中，所述截短的VP4蛋白的多核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示。

本发明的第三方面，提供了一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有本发明第二方面所述的多核苷酸。

本发明的第四方面，提供了一种基因工程细胞，所述基因工程细胞表达本发明第一方面所述的肠道病毒71型病毒样颗粒，或者所述的基因工程细胞含有本发明第三方面所述的表达载体，或者在基因组中整合有本发明第二方面所述的多核苷酸。

在另一优选例中，所述基因工程细胞为真核细胞，并且所述细胞的基因组中整合有肠道病毒71型外壳蛋白的表达盒；或者所述细胞中含有表达载体，所述表达载体含有肠道病毒71型外壳蛋白的表达盒；

所述基因工程细胞在胞内表达所述肠道病毒71型外壳蛋白，且所述外壳蛋白自组装形成所述病毒样颗粒(VLP)。

在另一优选例中，所述细胞为酵母细胞，优选为毕赤酵母细胞。