[发明专利]一种有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫学检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别是涉及了一种有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫学检测方法及试剂盒。

背景技术

有机磷类和氨基甲酸酯类农药由于其杀虫谱广，药效高，在我国的农业生产实践中得到了广泛的应用。由于其使用量大，应用面广，在食品安全和环境保护方面受到了普遍关注。尤其是一些剧毒、高毒的农药品种，如甲胺磷、甲基对硫磷、对硫磷等农药，由于其造成的急性毒性和残留毒性问题，已被禁止在蔬菜和水果上使用。但由于农民缺乏科学用药知识，常常出现高毒、剧毒农药的乱用和滥用问题。即使是那些毒性相对较低的农药，也存在农民加大用药剂量或采收前施药（不遵循安全间隔期）等问题，给消费者和环境安全造成了极大危害。因此开展农药残留的快速检测具有重要的现实意义。目前有机磷类农药残留检测常用的方法是酶抑制法和色谱分析法。色谱法的测定准确度和灵敏度都较高，但存在仪器化程度高、前处理操作复杂、耗时较长的问题。酶抑制法采用胆碱酯酶检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药，具有广谱性，且简便、快捷，但是其灵敏性较低（远达不到国家标准限量要求），而且需要复杂和昂贵的辅助设备，进一步限定其应用。

近年来，免疫测定技术在生物技术领域得到迅猛发展，它以特异性好、简单、快速、灵敏度高等优点，得到广泛的应用。随着免疫学技术的发展，其在农药残留中的检测应用也越来越深入，其中酶联免疫吸附测定（ELISA物质）技术在农药残留分析中表现最为活跃，已有大量文献报道了杀菌剂、杀虫剂、除草剂和一些植物（昆虫）生长调节剂的ELISA物质检测技术方法的建立，其检测水平可达到ng、甚至pg级。免疫层析法是另外一种广泛应用的检测方法，已经广泛应用于临床、兽药检测领域。目前，在农残检测领域也有免疫层析检测产品出现。但是不管是ELISA物质还是免疫层析试纸法都只能一次检测一两种（多的五六种）农药残留，根本无法满足目前在用农药达几百种的现实需求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫学方法，其具有广谱性，简便、快捷、低成本，且具有高灵敏性。本发明还提供了检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的试剂盒。

本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：

一种检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫学方法，其特征在于，用免疫学方法检测胆碱酯酶底物变化情况，以推断样品中是否含有有机磷类和氨基甲酸酯类农药。

如上所述的检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫学方法，其特征在于，所述免疫学方法是包括免疫层析法、酶联免疫吸附试验、时间分辨荧光免疫分析、化学发光免疫分析在内的任意一种免疫学分析方法。

如上所述的检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫学方法，其特征在于，所述胆碱酯酶可以是乙酰胆碱酯酶、丁酰胆碱酯酶中的一种或两者的混合物，其来源可以是动物、植物、基因工程重组蛋白。

如上所述的检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫学方法，其特征在于，所述用免疫学方法检测胆碱酯酶底物变化情况为用免疫学方法检测可被胆碱酯酶分解的A物质的变化情况，或者用免疫学方法检测被胆碱酯酶分解A物质而产生的B物质的变化情况，或者用免疫学方法检测A物质或B物质与D物质反应而生成的C物质的变化情况，或者用免疫学方法检测所述D物质的变化情况。

如上所述的检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫学方法，其特征在于，所述A物质为卤灵酯、吲哚乙酸酯、1-甲基-7-乙酰基喹啉、α-乙酸萘酯、β-乙酸萘酯、硫代丁酰胆碱、有机磷类药物、DTNB、靛酚乙酸酯中任一种。

一种检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫层析试剂盒，其特征在于，包括免疫层析试纸条、含有胆碱酯酶的容器、含有A物质的容器；所述免疫层析试纸条的层析膜上设有包被有A物质-载体蛋白偶联物或B物质-载体蛋白偶联物或C物质-载体蛋白偶联物或D物质-载体蛋白偶联物的检测区；所述A物质为在胆碱酯酶作用下可被分解的物质；所述B物质为所述A物质在胆碱酯酶作用下分解获得的物质；所述C物质为A物质或B物质与D物质的反应产物。

如上所述所述的检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫层析试剂盒，其特征在于，还包括含有D物质的容器。

如上所述的检测有机磷类和氨基甲酸酯类农药的免疫层析试剂盒，其特征在于，还包括含有纳米颗粒-抗A物质抗体偶联物或纳米颗粒-抗B物质抗体偶联物或纳米颗粒-抗C物质抗体偶联物或纳米颗粒-抗D物质抗体偶联物的容器。