[发明专利]猴STLV1病毒抗体的免疫梳检测试纸及制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于构建猴STLV1病毒抗体的免疫梳的SOE-PCR引物组，其特征在于，引物 STLV1F：如序列表SeqNo.1所示，引物STLV1R：如序列表SeqNo.2所示。

2.一种用于制备猴STLV1病毒抗体的免疫梳的重组表达载体pGEX-4T-STLV1，其特征 在于，序列如序列表SeqNo.3所示。

3.一种用于制备猴STLV1病毒抗体的免疫梳的重组表达载体pGEX-4T-STLV1的构建方 法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）根据猴STLV1病毒的基因序列，设计SOE-PCR扩增引物，引物STLV1F：如序列表Seq No.1所示，引物STLV1R：如序列表SeqNo.2所示；

（2）进行SOE-PCR扩增猴STLV1病毒基因；

（3）猴STLV1病毒基因的回收；

（4）克隆质粒pMD18T-STLV1的构建及测序；

（5）表达载体pGEX-4T-STLV1的构建，序列如序列表SeqNo.3所示。

4.根据权利要求3所述的一种用于制备猴STLV1病毒抗体的免疫梳的重组表达载体 pGEX-4T-STLV1的构建方法，其特征在于，所述的步骤（2）采用SOE-PCR反应的具体步骤如 下：

将混合液在95℃预变性5min，94℃变性1min，63℃退火30s，72℃延伸1min，30 个循环，72℃总延伸10min；

上述混合液如下所示：

。

5.根据权利要求3所述的一种用于制备猴STLV1病毒抗体的免疫梳的重组表达载体 pGEX-4T-STLV1的构建方法，其特征在于，所述的步骤（5）pGEX-4T-STLV1的构建方法具体 步骤如下：利用EcoRⅠ与XhoⅠ分别将pMD18T-STLV1和pGEX-4T-1进行双酶切，并胶回收酶切 的目的片段，将回收的目的片段进行连接，将连接产物转化到BL21（DE3）pLysS感受态细胞 中，利用氨苄青霉素抗性筛选阳性菌落，并提取质粒进行PvuⅠ酶切鉴定，将鉴定阳性的质粒 命名为pGEX-4T-STLV1。

6.一种猴STLV1病毒抗体的免疫梳检测试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）以重组表达载体pGEX-4T-STLV1表达猴STLV1病毒蛋白；

（2）猴STLV1蛋白的纯化与定量；

（3）免疫梳检测试纸的制备：

（3.1）将步骤（1）中表达的猴STLV1病毒蛋白以0.02mg/mL的浓度进行线性包被NC膜， 将膜晾干；

（3.2）用0.05g/mL的BSA封闭液封闭NC膜过夜，弃去封闭液后再次晾干；

（3.3）将包被好的NC膜裁剪成标准尺寸的试纸条，依次按一定间距整齐固定于PVC板 上，十二条为一组或直接裁剪包被好的NC膜制成免疫梳检测试纸，最终于自封袋中低温保 存备用。

7.根据权利要求6所述的一种猴STLV1病毒抗体的免疫梳检测试纸的制备方法制备的 一种猴STLV1病毒抗体的免疫梳检测试纸。